第二十章 经典液相色谱法

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1、《现代仪器分析》经典液相色谱法经典液相色谱法包括经典柱色谱法和平面色谱法。经典液相色谱法是在常压下靠重力或毛细作用输送流动相的色谱方法。经典色谱法与现代色谱法的区别：主要在于输送流动相方式、固定相种类和规格、分离效能、分析速度和检测灵敏度等方面。经典色谱法优点：设备简单，操作方便。分析速度快。广泛的应用：在药物研究、食品化学、环境化学、临床化学、法检分析及化学化工等行业都有用。（特别是在天然药物的分离研究及定性鉴别等方面发挥着独特的作用，是《中国药典》中药的主要鉴别手段之一。）内容简介第二节分配色谱法2第四节尺寸排阻色谱法4第一节吸附色谱法31第三节离子交换色谱法33第五节聚酰胺色谱

2、法35第一节吸附柱色谱法一、定义：固定相为固体吸附剂、流动相为液相的柱色谱法分离原理：K值不同而产生差速迁移应用：样品预处理、化学分离（一）吸附与吸附平衡(二)吸附等温线(absorptionisotherm)吸咐等温线：指在一定温度下，某一组分在固定相和流动相之间达到平衡时，以组分在固定相中的浓度Cs为纵坐标，以组分在流动相中的浓度Cm为横坐标得到的曲线。它是分配系数K的的图示方法吸咐等温线有三种类型：线型、凸型和凹型。（高斯峰）（拖尾峰）（前延峰）三种等温线的讨论1．线形吸附等温线：（高斯峰）整个工作浓度范围K是常数，谱带移动速度与浓度无关，故色谱峰前沿和后沿都是对称的，呈高斯分布。2．凸

3、形吸附等温线：（拖尾峰）K随浓度变化，浓度↑，K变↓，溶质移动速度加快，故色谱峰有一个变锐的前沿和扩散的后沿。3．凹形吸附等温线：（前延峰）K随浓度变化，浓度↑，K变↑，故色谱峰有一个扩散的前沿和锐利的后沿。进样量对保留值的影响（1）对称峰的保留值与进样量无关（2）拖尾峰的保留值随进样量增加而减少（3）前延峰的保留值与进样量增加而增加所以，为了保证流出曲线的对称性，防止拖尾，在色谱分析中就应该控制溶质的量，每种色谱方法有一定的线性范围，超出了这一范围，不对称峰就会出现。二、吸附剂吸附色谱的固定相为吸附剂，有以下特点（要求）：较大的比表面和一定的吸附能力——大于200M2/克较好的选择性良好的稳

4、定性（化学惰性），且不溶于洗脱剂粒度均匀，粒度要细，使用方便(d=75~150μm，即100~200目)(一)常用的吸附剂吸附剂可分为有机和无机两大类。有机类：活性炭、淀粉、蔗糖、乳糖、聚酰胺以及纤维素等；无机类：氧化铝、硅胺、氧化镁、碳酸钙、磷酸钙、滑石粉、硅藻土等。其中以硅胶和氧化铝、聚酰胺较为常用。1.硅胶常以SiO2·XH2O表示，是多孔性的硅氧交链结构。其骨架表面的硅醇基，能吸附大量水分，硅胶的活性与含水量有关。硅胶由于硅醇基的存在，能吸附大量水分，这种表面吸附水称为“结合水”，加热至105℃～110℃左右能除去。称为“活化”硅胶：中等极性吸附剂吸附机制：表面的硅醇基，与物质形成氢键

5、适用范围：具微酸性，适于酸性和中性物质失活：水与硅醇基结合使其失去活性活化：105-110℃加热30min粒度：100~200目硅醇基的两种形式:硅醚结构1.游离型2.键合型△到200℃非极性，不再对极性化合物有选择性保留作用而失去色谱活性2.氧化铝：强极性吸附剂吸附机制：碱性位置、Al-OH粒度：100~200目分类：碱性、中性和酸性活化温度：200~400℃适于分离酸性化合物，及对酸稳定的中性物质A酸性氧化铝(pH5～4)适用于碱性和中性化合物的分离C碱性氧化铝(pH9～10)适用范围广，分离生物碱等，及酸碱不稳定成分B中性氧化铝(pH7.5)2.氧化铝：为一种吸附力较强的吸附剂，具有分离

6、能力强、活性可以控制等优点。(二)吸附剂的活性硅胶含水量吸附剂的活性和含水量有一定的关系：（1）含水量愈高，其吸附活性愈低，（2）活性级数愈大，吸附力就愈弱。氧化铝与硅胶相比：副反应多、回收率低，样品处理量大、分离效果好255151036活性级别氧化铝含水量（%）038ⅠⅡⅢⅤⅣ015（活度测定法：Brockmamn法）3.聚酰胺商品名：锦纶、尼龙-6白色多孔的非晶型粉末不溶于水和有机溶剂，易溶于甲酸、酚、浓酸分离机制：主要是氢键吸附适用对象：黄酮类粒度：60~100目三、色谱条件的选择＜酰胺类＜醇类＜酚类＜羧酸类＜二甲胺＜酯类＜酮类＜醛类＜硫醇＜胺类＜醚＜硝基化合物烷烃＜烯烃烷烃＜烯烃＜醚＜

7、硝基化合物＜二甲胺＜酯类＜酮类＜醛类＜硫醇＜胺类＜酰胺类＜醇类＜酚类＜羧酸类常见化合物按其极性由小到大顺序为：常用溶剂的极性顺序为：吸附剂的极性顺序为：吸附剂和流动相的选择1、被测物质的结构、极性与吸附力吸附规律：通常组分极性强，吸附强，后出柱组分极性弱，吸附弱，先出柱多糖、蛋白质等大分子、生物碱盐苷类（皂苷、黄酮苷、蒽醌苷）黄酮、蒽醌等苷元、有机酸香豆素、萜类、挥发油等亲脂性成分极性渐小2、吸附