光动力疗法对白念珠菌细胞壁蛋白基因表达的影响（ppt）课件

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1、光动力疗法对白念珠菌细胞壁蛋白基因表达的影响研究项目情况名称：光动力疗法对白念珠菌细胞壁蛋白基因表达的影响类别：自由申请项目研究类型：应用基础研究申请金额：6万元研究期限：2011年10月-2013年10月申请者及项目组情况申请人：杨阳博士副主任医师项目组人员统计总人数高级中级初级在读硕士生72131参加单位：1一、研究内容和意义（摘要）白念珠菌粘附于阴道上皮细胞引起炎症刺激以及阴道上皮局部免疫防御机制低下是复发性阴道念珠菌病（RVVC）发病的两大原因，白念珠菌常以生物膜的形式存在，在生物膜微环境内，

2、白念珠菌能有效地抵御机体免疫力和抗真菌药物，诱导抗真菌药物耐药性的增加，从而导致临床白念珠菌药物治疗效果不理想；而细胞壁蛋白基因HWPI和ALS3在白念珠菌生物膜形成和细胞粘附过程起重要作用；光动力疗法对微生物有抑制作用，但具体作用机制仍未明确；本课题通过构建白念珠菌生物膜模型，分析光动力疗法作用前后白念珠菌的细胞壁蛋白基因HWP1和ALS3表达变化，白念珠菌生物膜生长动力活性的变化，探讨光动力疗法对防治复发性阴道念珠菌病的作用机制。二、立论依据VVC最常见的真菌感染性疾病，主要由白念珠菌引起，它是生

3、育期妇女最常见的外阴阴道炎症。RVVC病因较为复杂，治疗有一定的难度，从而对妇女的身心健康造成很大影响。白念珠菌常以生物膜(biofilm)的形式存在。在生物膜这样一个微环境内，白念珠菌能有效地抵御机体免疫力和抗真菌药物，诱导抗真菌药物耐药性的增加，从而导致临床治疗困难。因此关于白念珠菌生物膜的有效治疗方案的研究刻不容缓。1、白念珠菌生物膜是诱导抗真菌药物耐药的生物基础生物膜是一种独特而复杂、相互依存的与表面有关的微生物群体。对各种抗真菌药物具有高度耐药性是白念珠菌生物膜与游离态白念珠菌最大的区别之一

4、。白念珠菌生物膜对抗真菌药物耐药的机制尚未明了。生物膜相关微生物耐药机制包括:生物膜细胞低生长率;ECM生成后产生物理屏障,妨碍药物渗透入生物膜;生物膜耐药相关基因的表达。但它们在白念珠菌生物膜耐药中的作用仍不确定。2细胞壁蛋白HWPI和ALS3在白念珠菌生物膜形成和细胞粘附过程中起重要作用白念珠菌粘附于生物材料等固体表面形成生物被膜，这和游离培养截然不同，是细胞内启动了特殊的转录机制，引起复杂的生理变化。这期间经历了粘附和聚集、信号转导、细胞内基因的选择性表达等过程。其中粘附在整个过程中起着重要的作

5、用。主要表现在细胞壁蛋白AlS3的缺失，会导致生物膜形成障碍，在导入能自主表达该基因的载体后，又能恢复形成生物被膜的能力。3光动力疗法应用于抗白念珠菌的前景光动力疗法：是结合光敏剂、光、氧三种无害物质造成局部光氧化损伤的治疗方法。光动力疗法广泛应用在肿瘤及皮肤疾病治疗领域目前光动力治疗微生物的研究仍处于初级阶段，部分体外实验中光动力疗法已被证实具有抗微生物的作用。例：巴西Betania等发现光动力疗法在特定条件下可以灭活体外培养的口腔上皮细胞生长和粘附的白念珠菌。光动力疗法应用受光敏剂选择、微生物光敏

6、剂吸收率、光源选择、照射环境及时间等多因素影响，具体的治疗效果还需进一步研究。鉴于以上问题，进一步研究光动力疗法替代药物能否影响白念珠菌生物膜粘附、成熟、致病过程，对于进一步开展阴道念珠菌病的防治具有重要意义。既然白念珠菌生物膜的粘附、成熟以及作用局部阴道上皮炎症致病过程中扮演着重要的角色，而细胞壁蛋白HWPI和ALS3在白念珠菌生物膜形成和细胞粘附过程中起重要作用，光动力疗法是否能通过破坏念珠菌生物膜而达到的治疗阴道念珠菌病值得我们进一步深入探讨。因而，我们的研究假说是光动力疗法通过减低细胞壁蛋白H

7、WPI和ALS3降低白念珠菌生物膜粘附性致抑制白念珠菌，从而发挥治疗阴道念珠菌病和防止复发的作用。4本项目的特色与创新之处。1、本研究针对阴道念珠菌病首次提出非药物治疗方案——光动力疗法，从白念珠菌生物膜致病过程入手，探讨光动力疗法对白念珠菌生物膜体外模型粘附性作用机制，为光动力疗法治疗阴道念珠菌病的理论研究找到新的切入点和开拓新的思路。2、本研究在国内首次通过检测光动力疗法中光敏剂对白色念珠菌生物膜的最低抑菌浓度，及光动力疗法处理前后白色念珠菌的细胞壁蛋白基因HWP1和ALS3表达变化，从而分析和探

8、索光动力疗法对白色念珠菌生物膜的抑制作用。3、本研究的开展为进一步拓展光动力疗法治疗范围奠定基础。三、研究方案1、研究目标：构建白念珠菌生物膜体外模型。通过检测光动力疗法中光敏剂白念珠菌生物膜的最低抑菌浓度，及光动力疗法处理前后白念珠菌的细胞壁蛋白基因HWP1和ALS3表达变化，从而分析和探索光动力疗法对白念珠菌生物膜的抑制作用。2、研究内容：１.成功构建白念珠菌标准株和临床分离株生物膜体外模型，并利用激光扫描共聚焦显微镜系统观察其三维结构。2.微量稀释