美国专利全文翻译

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1、采血装置改进核酸调控领域的发明摘要方法和装置用于稳定的生物样品分析，包括通过样品采集装置从受试者获得生物样品的步骤;这个生物样品包括从受试者获得的至少一个循环游离第一核酸。该方法可包括当样品收集装置具有保护组合物包括防腐剂，一个可选择的抗凝血剂和猝灭剂，以形成包括所述保护剂组合物和样品的混合物接触生物样品的步骤。1.本文的教导涉及的装置和方法用于稳定和保持游离的DNA，而不会损坏DNA完整性的改进保护和调控核酸物质在收集，储存和运输的过程中。背景介绍2.游离的DNA（cfDNA）天然存在于血并已在很大程度上归因

2、于凋亡和坏死的过程。而血液中的cfDNA在1948年被发现。其在临床医学方面的影响并未实现超过二十年。具体地的说，cfDNA被证明存在于系统性红斑狼疮患者的血清中，cfDNA水平在癌症患者的血清中被提高。这些调查结果激发cfDNA在疾病诊断的潜在的兴趣。调查进行了类风湿关节炎，大肠癌，乳腺癌，胰腺癌，头颈部癌症患者都显示cfDNA浓度明显上升。该cfDNA提取自癌症患者的血浆或血清，呈现出典型特征的肿瘤DNA，并且可以充当非侵入性生物标记用于癌症检测和管理。3.有日益增长的兴趣在游离胎儿核酸的产前诊断的潜在用途

3、。Lancet是第一个展示出怀孕的供体血液样本具有较高的产妇cfDNA浓度也证明了胎儿cfDNA在孕妇血浆中的存在。临床应用涉及了胎儿cfDNA分析，包括了性别判定，单基因紊乱，妊娠相关疾病和非整倍体检测。4.从那时候开始，研究累积体内确定cfDNA是多种致病条件的预测和诊断指示灯;如癌症相关遗传和表观遗传改变，胎儿DNA突变和产前诊断，和病毒感染-通过检测人体血液中的病毒DNA。因此。精确检测cfDNA人类生物标本正在成为主流，非侵入性的途径允许评估，审查和疾病分类和监测临床分析。1.cfDNA归因于DNA片

4、段的可检测的多种体液。血浆或血清最常用于此目的，但是，存在的cfDNA在尿液，唾液，粪便，滑液，脑脊髓液和腹腔液中被检测出来。健康人的cfDNA的平均循环浓度是30ng/ml，cfDNA通常来说是双链的，大约为180-210个碱基大小。CfDNA的检测具有显著挑战是因为一下的原因：1.在产前检测的过程中，主要的产妇细胞材料可干扰胎儿cfDNA检测，2.样品在抽取后加工可以导致细胞裂解，导致异常增加循环cfDNA的量。3.相关的低水平的cfDNA强调潜在的风险产生假阴性的结果由于缺少目标cfDNA序列由于样品不稳

5、定或不恰当的加工。为此，尽量减少污染的细胞DNA和维护cfDNA已包含的各种预分析因素，如血液收集管的类型，样品储存条件，以及离心协议。例如抗凝血剂如EDTA，肝素，柠檬酸盐和预防的全血凝血细胞，通过减少从白细胞的细胞群的DNA释放。另外，离心分离条件的优化是必需的，以防止裂解而充分从不含细胞的血浆分离单独的完整的细胞。2.由于cfDNA生物标记的低数量，建议的基因组DNA（gDNA）的背景水平被最小化，以提供精确的测量cfDNA水平。它是进一步有利的cfDNA的结构完整性被保持，由于最小金额可用于分析。因此，

6、有必要解决几个预先分析的问题出现在抽血和随后的DNA提取的过程中。这些问题包括延迟血液处理，血液储藏温度和在运输过程中震荡样品。这样的条件可能改变血浆DNA（质粒DNA）水平通过引起裂解核血细胞释放基因组DNA和混淆真正的cfDNA。因此，它对于考虑血液采集装置的类型和cfDNA样品工作后放血条件是很重要的。3.以前的努力都集中在化学方法，如使用甲醛基固定使cfDNA的分数浓度变大和延长的后静脉穿刺的时间，一个样品可以被有效的分析。但是研究探讨甲醛的有效性保存全血进行的延长性分析cfDNA浓度在生物样品中已经提

7、供了统计不一致，例如，已经证明，与甲醛一起治疗血液样品后立即抽血对保护胎儿cfDNA在材料中的比例不具有有利影响。1.因此，有必要需要方法去稳定和保护cfDNA，由此结构完整性被维持和基因组背景DNA被最小化。使运输和储存可能使cfDNA影响最小。有进一步需要这样的方法，其中醛固定的不利影响被避免。发明总结2.使用本文的教导使用协议使用独特的保护剂组合物成功地保留样品，同时使用多种分析技术在一段长时间内完全稳定DNA。本教导提供了一个一致并有效的方法在血浆里保存DNA。数据展示介绍了一种方法，可降低血细胞裂解，

8、核酸酶的活性，并允许准确和精确的解析分析靠保存的随着时间的推移恢复cfDNA的最后浓度，在这样做时，本教导提供了一种新的方法，提高了cfDNA血浆下游临床分析。本发明防止污染血浆cfDNA与细胞DNA，这是由内稳定的血细胞从受损细胞释放的一个样本。3.本教导的描述通过含抑制脱氧核糖核酸酶的活性血浆保护cfDNA。作为有核血细胞的稳定的结果，它不再需要在静脉穿刺后立即分离血浆。此外，样品