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1、辅酶Q10前体脂质体的研制及其特性研究09生工(1)班陈览0802011009摘要:为提高辅酶Q10脂质体的稳定性,采用冷冻干燥法制备辅酶Q10前体脂质体。选择蔗糖、海藻糖、甘露醇、乳糖等作冻干保护剂,研究复水前后辅酶Q10。脂质体的形态、粒径分布和包封率,并研究了辅酶Q10。前体脂质体红外光谱性质,比较冷冻干燥保护剂种类及用量对辅酶Q10。脂质体的保护作用。优选保护剂为海藻糖,与卵磷脂质量比为4:l,辅酶Q10前体脂质体水合重建后平均粒径为508nm,包封率达75%。红外光谱分析表明海藻糖与磷脂P=0基团之间形成氢键作用最强。关键词:辅酶Q10;前体脂质体;冷冻干燥法;冷冻保护
2、剂;红外光谱引言辅酶Q10(CoQ10)是天然抗氧化剂和细胞代激活剂【1-2】。美国FDA早征80年代已批准辅酶Q10可作为膳食补充剂【3】。采用脂质体包埋的辅酶Q10具有很好的水溶性,更利于人体吸收,存保健食品领域也将有广阔的应用前景【4】。普通脂质体以液体形式存在。在贮存过程中易发牛聚集沉降、磷脂氧化分解、包封物渗漏等问题,导致脂质体不稳定。前体脂质体由Payne等首次提出,将构成脂质休的膜材、药物及支撑撑剂用适当方制成颗粒状、冻干状等干燥形式,用前加水水化后即可形成脂质体【5】。1978年Vanleberghe等首次报道采用冷冻干燥法提高脂质体的贮存稳定性。目前,该法已成为
3、较有前途的改善脂质体制剂长期稳定性的方法之一【6】。本文采用冷冻干燥法研制辅酶Q10川前体脂质体,选择合适的保护剂以提高其复水稳定性,并研究有关性质,探讨保护剂对脂质体的作用机制。1材料与方法1.1材料与设备辅酶Q1098.0%~101.0%,日清制药;蛋黄磷脂(EPC)生化试剂,华东!JIlj范大学化J二厂;吐温80(Tween80)化学纯,围药(集团)上海化学试剂公刊;海藻糖(trehalose,Tre)食品级,日本林原株氏会社;乳糖分析纯一海恒信化学试剂有限公司;胆固醇(Cho1)、蔗糖、目露醇、葡萄糖、IlI梨醇等均为分析纯,国药集团化学试剂有限公司。uV—ll00型紫外
4、一可见分光光度计北京瑞利分析仪器公司;VCX50型超声处理器美国SONICS&MATERIALS公司;FreeZone6升立式冻下机Labconeo公司;Nano—ZS90型粒径分析仪英国Malvern公司;Nexus傅叶红外光谱仪美国Nicolet公司;CSPM4000扫描探针显微镜广州本原纳米仪器有限公司。1.2实验方法1.2.1辅酶Q10前体脂质体的制备1.2.1.1采用乙醇注入一超声法【7】制备液态辅酶Q10脂质体按配方称取磷脂、胆醇、Tween80及辅酶Q10比例为EPL:CoQ10:Chol:Tween80=2.5:12:0.4:1.8(g/g),EPL的浓度为1.2
5、5%(g/mL),加入2mL无水乙醇,于55℃水浴至溶,用注射器快速将其注入20mL水化介质,取适量保护剂用pH7.4,0.01mol/L磷酸缓冲液溶解,搅拌水化30min,旋转蒸发除去乙醇(55oC,真空度0.1MPa),迅速冷却,冰浴超声处理4min(脉冲1s/1s),冷冻离心30min(11000Xg,4℃)后充人N,密封,置于冰箱冷藏保存。空白脂质体的制备则称取等量脂质溶于乙醇,其余步骤与辅酶Q10脂质体的制备相同。1.2.1.2冷冻干燥工艺取1mL辅酶Q10脂质体分装于安瓿瓶中,一70℃预冻24h,冷冻干燥(一30oC20h,一10oClOh,一4oC5h,25oC3h
6、,真空度<0.1MPa),压盖封口,即得辅酶Q10前体脂质体,冻干后的样品置干燥器中,于室温避光密闭保存。1.2.1.3复水取1瓶辅酶Q10前体脂质体,加入1mL去离子水充分混匀,即得辅酶Q10脂质体。1.2.2辅酶Q10脂质体包封率的测定辅酶Q10含量的测定:采用Tween80增溶一紫外分光光度法;游离辅酶Q10含量的测定:采用正戊烷洗涤一紫外分光光度法【8】。1.2.3辅酶Q10脂质体粒径的测定采用配有He/Ne激光器(入=633nm)的Nano—ZS90粒径分析仪,散射角为90。。将待测样品装入聚苯乙烯比色lI[中(折光指数1.33),25±0.1℃下保温3min,测定,记
7、录平均粒径(Dz)和粒径分布情况(多分散指数PDI)。1.2.4辅酶Q10前体脂质体傅里叶红外光谱(FTIR)分析取出少许辅酶Q10前体脂质体样品,与干燥的KBr混合。研磨至细粉状,充分混合后置人锭剂成型器中进行压片;将压片放人红外光谱仪样品槽中,测定红外吸收光谱,波数范围为400~4000em~。1.2.5复水前后辅酶Q10脂质体的形态观察采用原子力显微镜观察复水前后辅酶Q10脂质体的外观形貌。将辅酶Q10脂质体用磷酸缓冲液稀释50倍,少量样品滴在新解理的云母表面并铺展,用滤纸
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