黄芩苷酶的制备及其理化性质研究

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1、黄芩苷酶的制备及其理化性质研究任慧霞张敏山东大学药学院生化与生物技术药物研究所（济南250012）摘要：目的研究黄芩苷酶的制备及其理化性质。方法采用提取、透析、sephadexG150凝胶柱层析及冷冻干燥的方法获得黄芩苷酶；利用Linewear-Burk作图法求得该酶对黄芩苷的Km值，研究了pH值、温度、离子强度、底物浓度等对黄芩苷酶活力的影响。结果该酶对黄芩苷的Km值为57.4mmol/L，最适pH值为5.8，温度为45℃，不同离子的影响、分子量，底物浓度及产物对该酶活性基本无影响，反应初速度随酶浓度的增

2、加而增加并呈现良好的线性关系。结论获得活性较高理化性质较稳定的一种黄芩苷酶。关键词：黄芩苷；糖苷酶；理化性质关于PreparationandCharacterizationaboutflavonoidsGlycosidaseRENHui-xiaZHANGMin,InstitueofBiochemicalandBiotechnologicalDrug,SchoolofPharmaceuticalScience,ShandongUniversity,Jinan250012Abstract：PurposeTome

3、asuretheKmofthisflavonoidsGlycosidasefromScutellariabaicalensisGeorgiwithbaicalin，studytheeffectofpH,temperature,ionicstrengthandsubstrateconcentrationonenzymeactivity,andthelinearrelationofenzymeconcentration.MethodsUsingmeansofcollectionanddislysis,sepha

4、dexG150columnchromatographytopreparecrudeenzyme.MeasuringKmbyLinewear-Burkgraphicmethod,calculatetheenzymeactivitybymeasuringtheabsorbanceofbaicaleinat450nmwithultravioletspectrophotometry.ResultsTheKmwithbaicaleinis57.4mmol/L,itsoptimumpH,temperature,ioni

5、cstrengthandsubstrateconcentrationis5.8,45℃,1mol/L，40mmol/L，respectively.ConclusionThephysico-chemicalpropertyofthisnewflavonoidsGlycosidasefromScutellariabaicalensisGeorgiwasstudied.Keywords:Glycosidase;Characterization；　糖苷酶是指一类以内切或外切方式水解各种含糖化合物(包括单糖苷、寡糖、

6、多糖、皂甙、糖蛋白等)中的糖苷键,生成单糖、寡糖或糖复合物的酶，它是维持生物体基本功能的重要酶类之一,在自然界广有分布,几乎各种类型的动、植物和微生物中,都有糖苷酶存在[1，2]。常根据其降解的底物对其命名，,如水解β-D-葡萄糖苷键的酶称为β-D-葡萄糖苷酶，水解甘露糖苷键的酶称为甘露糖苷酶。本实验室研究的主要是能将黄芩中黄芩苷降解为黄芩素的一类糖苷酶，故称之为黄芩黄苷酶。　黄芩为唇形科植物黄芩（ScutellariabaicalensisGeorgi）的干燥根。在临床中属常用中药，用于治疗上呼吸道感染、

7、泌尿系统感染、菌痢、肝炎、高血压等[3]。　黄芩苷(baicalin)是黄芩中主要的有效成分之一,属葡萄糖醛酸苷类,水解后产生黄芩素和葡萄糖醛酸,具有清热解毒、抗炎、利胆、降压、利尿、抗变态反应等多方面的作用[4]。本文主要对其理化性质进行了初步的研究，测定了其动力学常数Km值，考查了pH值、温度、离子强度、底物浓度对酶活力的影响，以及酶浓度的线性关系。1材料与方法1.1材料酶提取植物原料，实验室购得；黄芩苷标准品，实验室自制；黄芩素标准品，实验室自制；透析袋，；sephadexG150，SIGMA公司；其

8、他试剂均为国产分析纯。AKTAexplorer快速蛋白质纯化系统,AmershamBiosciences公司；UV-2102PC型紫外可见分光光度计，Unico上海仪器有限公司；冷冻离心机，Heraeus公司；FD-1-55冷冻干燥机，北京博医康试验仪器有限公司。方法1.2.1粗酶的分离纯化1.2.1.1原料的预处理：称取原料植物干燥粉末25g，加入十倍体积的蒸馏水溶解置于45℃烘箱内过夜后，抽滤，弃残渣保留上清