石斑鱼神经坏死病毒传播途径阻断的初步研究

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1、石斑鱼神经坏死病毒传播途径阻断的初步研究林克冰方琼珊吴建绍周宸何丽斌林琪王涵生（福建省水产研究所，福建，厦门361012）摘要：本文报告了斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)苗种培育中亲鱼、卵、饵料等几个关键环节的病毒携带检测以及几种药物对病毒的消除效果的试验。用RT-PCR法检测，斜带石斑鱼亲鱼的粪便、卵、稚鱼、仔鱼，饵料轮虫、桡足类中都有检出神经坏死病毒(nervousnecrosisvirus，NNV)。聚维酮碘50～100mg/L浸泡卵20min、浸泡轮虫、桡足类30min，盐酸吗啉胍3～5mg/L浸泡卵30min、浸泡轮虫、桡足类40min，聚维酮

2、碘50mg/L+盐酸吗啉胍3mg/L浸泡卵20min、浸泡轮虫、桡足类30min可有效灭活所携带的神经坏死病毒活性。关键词：斜带石斑鱼，神经坏死病毒，传播途径，阻断鱼类神经坏死病毒(nervousnecrosisvirus，NNV)[1]，是一种世界范围内流行的海水鱼类病毒病，主要发生在海水鱼类种苗生产阶段，是近几年来石斑鱼苗种培育中危害最大的病原，鱼苗死亡率高达90%以上，给石斑鱼养殖业的发展带来严重的危害[3～4,7]。目前普遍认为神经坏死病毒的传播有水平传播和垂直传播两个途径[5～6]，明确两个传播途径病毒的携带者以及具体的传播途径，是种苗培育生产中防治神经坏死病毒病

3、的关键。本文报告了斜带石斑鱼苗种培育中亲鱼、卵、饵料等几个关键环节的病毒携带检测以及几种药物对病毒的消除效果的试验，为深入研究神经坏死病毒传播途径奠定基础，同时也为石斑鱼苗种培育生产中神经坏死病毒病的防治提供理论依据。1．材料和方法1.1.1实验鱼：斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)亲鱼粪便分别于2007年8月16日取自福建省漳浦佛坛联合水产有限公司育苗室，2009年9月22日2010年10月18日取自诏安大华水产有限公司育苗场。斜带石斑鱼卵、孵化稚鱼分别于2007年8月16日和2010年8月21日取自福建省漳浦佛坛联合水产有限公司育苗室、2009年8月2

4、6日取自东山乌礁湾育苗室、2008年9月23日2010年9月5日取自于澎湖渔业东山分公司育苗场。斜带石斑鱼稚鱼分别取自于诏安大华水产有限公司育苗场和诏安海康水产养殖有限公司育苗场。1.1.2饵料：轮虫分别取自诏安大华水产有限公司育苗场、诏安海康水产养殖有限公司育苗场、诏安梅岭海水鱼养殖土池，海区吊养牡蛎受精卵、海区捕捞桡足类、海区捕捞小杂鱼鱼糜。上述样品取后立即冷冻后转入-65℃冷冻保存。1.1.3聚维酮碘：配成20mg/L、50mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/L盐酸吗啉胍：配成1mg/L、3mg/L、5mg/L、7mg/L、9mg/L聚维酮碘+盐酸吗

5、啉胍：20mg/L、50mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/L分别加入3mg/L的盐酸吗啉胍1.1.4卵、轮虫、牡蛎受精卵、桡足类分别用上述海水溶液浸泡一定时间后取少量立即冷冻，然后转入-65℃冷冻保存1.1.5试剂盒：国家海洋局第三海洋研究所研制的神经坏死病毒RT-PCR检测试剂盒。作者简介：林克冰,厦门东渡海山路7号9604，361012，Tel：,0592-6012063，E-mail：kebingl@sina.com。51.1.6聚维酮碘为北大泰普科技有限公司生产，盐酸吗啉胍为吉林省博大制药有限责任公司生产2．结果表1斜带石斑鱼亲鱼粪便、1d稚鱼、

6、杂鱼糜、牡蛎受精卵神经坏死病毒RT-PCR检测结果Fig1　NNVRT-PCRdetectionofEpinepheluscoioidesdung,1doldlarvae,surimi,oysteroosperm批次RT-PCR批次RT-PCR批次RT-PCR粪便2007.08.16++稚鱼1（2007.08.06）++鱼糜（2007.08.20）—粪便2009.09.22—稚鱼2（2009.08.26）+鱼糜（2008.09.25）—粪便2010.10.18—稚鱼3（2008.09.23）—ML1（2007.08.07）—稚鱼4（2010.08.21）++ML2（2007

7、.09.13）—稚鱼5（2010.09.05）—ML3（2008.08.20）—++表示强阳性，+表示弱阳性，—表示阴性，ML表示牡蛎受精卵表2聚维酮碘浸泡斜带石斑鱼卵20min前、后RT-PCR检测结果Fig2NNVRT-PCRdetectionofEpinepheluscoioideseggsbeforeandafterexposuretoPovidoneIodine20min聚维酮碘mg/L2050100150200处理前处理后处理前处理后处理前处理后处理前处理后处理前处理后1（2007.08.06）++++