工作原理及简单操作

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1、Agilent1260HPLC工作原理及简单操作10-12-2012Agilent1260HPLC工作原理及简单操作培训目的：1.了解HPLC各模块的原理；2.掌握HPLC各模块日常维护的要点；3.掌握开机，关机。Agilent1260HPLC工作原理及简单操作内容：一、HPLC各模块的原理及维护；二、开机/关机操作；三、讨论；四、评估。一、HPLC各模块工作原理及维护HPLC：高效液相色谱仪（HighPerformancesLiquidChromatography）。由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几个部分组成。工作时储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经

2、样品进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。关于溶剂HPLC各模块的工作原理及维护所有溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水；所有溶剂应经过过滤。过滤水应使用水相滤膜，过滤有机相应使用有机相滤膜，不能混用。每一次滤膜只能用一次，不能重复使用；如果没有在线脱气机，所有溶剂应经过超声脱气；水易滋生藻类，避免直接照射，过滤水最好使用

3、不要超过两天；如果条件允许可向溶剂中加入0.001-0.0001M的叠氮化钠；注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂；避免使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂；在溶剂瓶中的溶剂过滤头可能会堵塞，必要时小心拿下用强酸（35%硝酸）浸泡时，用水冲洗，但不要使用超声处理。关于在线真空脱气机在线真空脱气机的管路容量为12ml，压力范围为110Torr-190Torr。为保证脱气机的良好使用性能，在下述情况下需要用注射器抽洗脱气机管路，每个通道使用不低于30ml的异丙醇。1，新的脱气机或新的管路；2，更换了溶剂，尤其是缓冲盐与有机相之间、两个不相容流动相之间的互换时；3，输液泵关闭了一段时

4、间，或使用挥发性溶剂混合物。HPLC各模块的工作原理及维护更换过滤白头在清洗阀中的过滤白头需要更换，在清洗状态下，设置流量为5ml/min，此时系统压力如果超过10bar，则需更换过滤白头。更换步骤：1，关闭泵电源；2，用扳手去掉通往进样器上的毛细管，拔掉废液管；3，用专用扳手小心把清洗阀卸下来；4，轻轻去掉聚四氟乙烯密封垫和金密封垫，将过滤白头拿出；5，更换新的过滤白头，装上聚四氟乙烯密封垫和金密封垫；6，装上清洗阀；7，连接管路。过滤白头聚四氟乙烯密封垫金密封垫清洗阀PurgeValveHPLC各模块的工作原理及维护更换过滤白头1，去掉毛细管，废液管2，卸掉清洗阀3，更换过

5、滤白头4，更换白头，装好清洗阀HPLC各模块的工作原理及维护泵的注意事项1，溶剂的过滤、脱气；2，避免使用腐蚀性溶剂；3，在满足分析的前提下，尽可能使用较低的流速—较低的系统压力。4，更换过滤白头；5，考虑溶剂的相容性；6，尽可能使用新鲜的水；7，使用0.01M以上浓度的缓冲溶液要选配柱塞清洗组件，清洗液不能干涸。8，使用正相溶剂比如环己烷时，建议使用聚乙烯密封垫，部件号为0905-1420，在0—200Bar下使用聚乙烯密封垫比标准密封垫更耐磨损。四元泵：四元泵多通道比例阀MCGV使用时注意，缓冲溶液要放在A、D通道，以避免盐颗粒析出。建议A通道：水；B、C通道：有机溶剂；D

6、通道：缓冲溶液。HPLC各模块的工作原理及维护样品准备样品完全溶解在流动相中样品没有完全溶解过滤样品，确保样品中不含固体颗粒用流动相或比流动相弱的溶剂溶解样品进样量尽量小关于进样器HPLC各模块的工作原理及维护关于进样器准备位置调用样品瓶吸样品进样和运行位置标准进样过程...HPLC各模块的工作原理及维护自动进样器样品要干净、经过过滤。洗针：把样品残留降低到最小限度，可降低进样的记忆效应，洗针瓶最好不要加瓶垫。多次吸液用于进样量大于100ulHPLC各模块的工作原理及维护关于恒温柱箱控制范围：最高80ºC，低温低于室温10ºC。预热块体积左面为3ul，右面为6ul，除非有特殊

7、要求，左右温度应保持一致。一定要关闭前面板。HPLC各模块的工作原理及维护关于原理HPLC各模块的工作原理及维护关于色谱柱保护过滤所有的溶剂和样品使用保护柱仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中的缓冲液。柱子在不使用时，两端密封保存在适当的溶剂中保存柱子注意色谱柱的pH值使用范围不要高压冲洗柱子不要高温下过长时间使用硅胶键合相HPLC各模块的工作原理及维护检测器—DADDAD(DiodeArrayDetector)二极管阵列检测器，是以光电二极管阵列作为检测元件的UV-VIS检测器.DA