蓝白斑试验课件

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1、原核生物表达体系:大肠杆菌、枯草杆菌、农杆菌大肠杆菌表达体系的优点:积累了充足经验,有数不清的载体可供应用;可因不同载体而选择不同菌种作宿主;操作安全,致病能力低;成本相对低得多;真核生物的基因先在原核体系上构建克隆,称为亚克隆(subclone),然后采用其它方式转移至真核细胞上表达。缺点:原核生物载体构建的重组体是无法进入动物细胞进行表达;没有加工所需的酶系统;热源、内毒素不易除去;常会形成包涵体。表达体系的发展表达体载体宿主第一代原核生物表达体系质粒、噬菌体细菌第二代酵母表达体系穿梭质粒酵母第三代哺乳类细胞表达体系病毒、脂质体培养细胞

2、第四代基因直接导入DNA本身生殖细胞、体细胞、个体乳糖操纵子的天然诱导物是乳糖乳糖类似物异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)有更强的诱导作用。IPTG配合使用在基因工程可作蓝白斑筛选。LacZ基因编码的乳糖苷酶X-gal蓝色吲哚产物三、蓝白斑试验(IPTG-Xgal试验)诱导物ZYXPOZYXPO乳糖标志补救(ß-半乳糖苷酶法)lacZAmN2H片段COOH片段lacZX-galLacZ蓝色化合物X-gal(LacZ基因N端序列)插入片段(LacZ基因失活)LacZ基因N端序列LacZ酶

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