免疫球蛋白检测及应用

《免疫球蛋白检测及应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第十七章免疫球蛋白的检测及应用医学检验系王洪兴概述：人类免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）由浆细胞合成分泌的一组具有抗体活性的蛋白质。按其重链分为五类，IgG有四个亚型，IgA有二个亚型并有sIgA，IgM亦有二个亚型。Ig主要存在于血液中，占血浆蛋白总量的20%，也可存在于其他体液中，其含量依次为IgG、A、M、D、E。第一节IgG、IgA、IgM的测定一、单向免疫扩散法其原理是将抗血清均匀混入琼脂，然后打孔加入待测血清（Ig），血清向四周扩散，形成可见的沉淀环，量取沉淀环直径与标准曲线，推算出抗体含量，待测血清要做一定稀释。该方法是经典方法，但可能出现误差。1）待

2、测血清或标准液溢出加样孔2）固相抗体或抗原过量而使沉淀过大或过小，前者形成海德堡曲线，后者形成钩状效应P543）加样量不足或过多，或混有气泡4）加样孔破裂5）琼脂板存放时间过长，水分蒸发或变形6）琼脂半不平，厚薄不平7）打孔后挑取琼脂将琼脂底挑取，以致待测血清底部流溢8）扩散时置盒不水平，导致沉淀环不圆该方法影响因素多，实验时间长，结果的重复性差，该技术设置了钩状效应校正系统。第二节体液中IgG、IgA、IgM测定的临床意义一、血清Ig定量的临床意义1.低Ig血症先天性低Ig血症获得性低Ig血症2.高Ig血症1）多克隆Ig增高2）单克隆Ig增高二、尿液Ig定量的临床意义免疫循环复合

3、物沉积在肾小球基底膜并激活补体而造成肾组织损害，检测蛋白尿，结合临床对肾功能评价有一定的作用。尿液中检测游离轻链是诊断轻链病的主要手段，并对多发性骨髓瘤等疾病的分型鉴定及预后判断均有重要意义。三、脑脊液Ig定量的临床意义中枢神经系统可以产生很强的免疫应答，血液中的Ig可渗透至CSF，生理情况下血中通过通透性正常的血-脑屏障（bloodbrainbarrier，BBB）而进入CSF。IgG易通过BBB，IgA略难，IgM分子大，更难通过BBB。当脑组织或脑膜有病变时脉络丛通透性增加，BBB发生破坏，或自身病变组织产生病理产物，进入脑脊液，使脑脊液组织发生改变。第三节IgE和IgD的测

4、定一、IgE的测定方法1、放射免疫法：固相抗-IgE+IgE+125I标记抗人IgE2、化学发光免疫分析法：固相抗-IgE+IgE+酶标抗IgE+底物3、乳胶颗粒免疫浊度法4、酶免疫试验二、IgD的测定方法（一）测定方法放射免疫测定法和乳胶颗粒免疫浊度法（二）临床意义：IgD含量低，除SmIgD为膜表面受体外，其他生物学功能不明，在妊娠末期，大量吸烟者和IgD骨髓瘤患者血清中IgD含量升高。第四节异常免疫球蛋白的检测一、M蛋白的检测与鉴定M蛋白是一种异常单克隆免疫球蛋白，多见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤。（一）血清蛋白区带电泳IgG型多位于α区与慢γ区IgA型多位于慢γ

5、区与β区IgM型多位于β2区或γ区IgD型多位于β区或γ区但最终鉴定需用特异性抗体，在轻链病时M蛋白呈淡染区带常在β或γ区，需与尿中本周蛋白检测或尿蛋白电泳同时观察。（二）免疫球蛋白定量测定（三）轻链片段定量测定（四）免疫电泳及免疫固定电泳1.免疫电泳2.免疫固定电泳免疫固定电泳有以下特点：1.周期短2.敏感性高3.分辨清晰4.结果易于分析（五）本周蛋白的检测即尿中游离的免疫球蛋白轻链，对轻链病作出诊断，并对多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症、重链病等疾病的诊断、鉴别和预后判断均有一定帮助。本周蛋白在pH5.0的条件下，加热至50～60℃出现沉淀，继续加热至90℃以后又重新溶解，故称

6、凝溶蛋白。也可用抗κ和λ型轻链抗血清进行免疫电泳，为了提高检出率，尿标本宜先用聚乙二醇通过半透膜浓缩。二、冷球蛋白的检测与鉴定是血液中的一种特殊蛋白质，在4℃时不溶解并自发沉淀，30℃易于聚合，它们固定补体产生炎症反应，类似IC引起的疾病。冷球蛋白存在于许多疾病。冷球蛋白有两种类型，单株型和混合型1）IgG或IgM单株型冷球蛋白2）混合型冷球蛋白。IgG、IgM、IgA多株型与IgG、IgM和补体C3混合型（一）定性分析分离血清作二支分装，一支置4℃，一支置37℃，直立，一般于24～72小时，4℃一管可出现沉淀（二）定量分析将沉淀用冷pH7.0，0.05mol/L磷酸盐缓冲液洗涤，

7、然后将沉淀再溶解于10倍体积的pH8.6的0.05mol巴比妥/巴比妥钠缓冲液中，置37℃30min，进行免疫电泳或免疫固定电泳进行型别鉴定（三）注意事项1.部分单克隆冷球蛋白可在低于10℃时发生沉淀，故取标本时要保温2.部分冷球蛋白在冷的条件下可迅速沉淀，但有的需要数天，故此应放置一周3.正常人血清也可含有冷球蛋白，但属多克隆冷球蛋白的性质，且含量低4.冷纤维蛋白原、C反应蛋白-蛋白复合物和肝素沉淀蛋白等也具有冷沉淀特性，实验时应加以区别思考题：1．IgG、IgA、