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时间:2018-10-02
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1、第十七章免疫球蛋白的检测及应用医学检验系王洪兴概述:人类免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)由浆细胞合成分泌的一组具有抗体活性的蛋白质。按其重链分为五类,IgG有四个亚型,IgA有二个亚型并有sIgA,IgM亦有二个亚型。Ig主要存在于血液中,占血浆蛋白总量的20%,也可存在于其他体液中,其含量依次为IgG、A、M、D、E。第一节IgG、IgA、IgM的测定一、单向免疫扩散法其原理是将抗血清均匀混入琼脂,然后打孔加入待测血清(Ig),血清向四周扩散,形成可见的沉淀环,量取沉淀环直径与标准曲线,推算出抗体含量,待测血清要做一定稀释。该方法是经典方法,但可能出现误差。1)待
2、测血清或标准液溢出加样孔2)固相抗体或抗原过量而使沉淀过大或过小,前者形成海德堡曲线,后者形成钩状效应P543)加样量不足或过多,或混有气泡4)加样孔破裂5)琼脂板存放时间过长,水分蒸发或变形6)琼脂半不平,厚薄不平7)打孔后挑取琼脂将琼脂底挑取,以致待测血清底部流溢8)扩散时置盒不水平,导致沉淀环不圆该方法影响因素多,实验时间长,结果的重复性差,该技术设置了钩状效应校正系统。第二节体液中IgG、IgA、IgM测定的临床意义一、血清Ig定量的临床意义1.低Ig血症先天性低Ig血症获得性低Ig血症2.高Ig血症1)多克隆Ig增高2)单克隆Ig增高二、尿液Ig定量的临床意义免疫循环复合
3、物沉积在肾小球基底膜并激活补体而造成肾组织损害,检测蛋白尿,结合临床对肾功能评价有一定的作用。尿液中检测游离轻链是诊断轻链病的主要手段,并对多发性骨髓瘤等疾病的分型鉴定及预后判断均有重要意义。三、脑脊液Ig定量的临床意义中枢神经系统可以产生很强的免疫应答,血液中的Ig可渗透至CSF,生理情况下血中通过通透性正常的血-脑屏障(bloodbrainbarrier,BBB)而进入CSF。IgG易通过BBB,IgA略难,IgM分子大,更难通过BBB。当脑组织或脑膜有病变时脉络丛通透性增加,BBB发生破坏,或自身病变组织产生病理产物,进入脑脊液,使脑脊液组织发生改变。第三节IgE和IgD的测
4、定一、IgE的测定方法1、放射免疫法:固相抗-IgE+IgE+125I标记抗人IgE2、化学发光免疫分析法:固相抗-IgE+IgE+酶标抗IgE+底物3、乳胶颗粒免疫浊度法4、酶免疫试验二、IgD的测定方法(一)测定方法放射免疫测定法和乳胶颗粒免疫浊度法(二)临床意义:IgD含量低,除SmIgD为膜表面受体外,其他生物学功能不明,在妊娠末期,大量吸烟者和IgD骨髓瘤患者血清中IgD含量升高。第四节异常免疫球蛋白的检测一、M蛋白的检测与鉴定M蛋白是一种异常单克隆免疫球蛋白,多见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤。(一)血清蛋白区带电泳IgG型多位于α区与慢γ区IgA型多位于慢γ
5、区与β区IgM型多位于β2区或γ区IgD型多位于β区或γ区但最终鉴定需用特异性抗体,在轻链病时M蛋白呈淡染区带常在β或γ区,需与尿中本周蛋白检测或尿蛋白电泳同时观察。(二)免疫球蛋白定量测定(三)轻链片段定量测定(四)免疫电泳及免疫固定电泳1.免疫电泳2.免疫固定电泳免疫固定电泳有以下特点:1.周期短2.敏感性高3.分辨清晰4.结果易于分析(五)本周蛋白的检测即尿中游离的免疫球蛋白轻链,对轻链病作出诊断,并对多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症、重链病等疾病的诊断、鉴别和预后判断均有一定帮助。本周蛋白在pH5.0的条件下,加热至50~60℃出现沉淀,继续加热至90℃以后又重新溶解,故称
6、凝溶蛋白。也可用抗κ和λ型轻链抗血清进行免疫电泳,为了提高检出率,尿标本宜先用聚乙二醇通过半透膜浓缩。二、冷球蛋白的检测与鉴定是血液中的一种特殊蛋白质,在4℃时不溶解并自发沉淀,30℃易于聚合,它们固定补体产生炎症反应,类似IC引起的疾病。冷球蛋白存在于许多疾病。冷球蛋白有两种类型,单株型和混合型1)IgG或IgM单株型冷球蛋白2)混合型冷球蛋白。IgG、IgM、IgA多株型与IgG、IgM和补体C3混合型(一)定性分析分离血清作二支分装,一支置4℃,一支置37℃,直立,一般于24~72小时,4℃一管可出现沉淀(二)定量分析将沉淀用冷pH7.0,0.05mol/L磷酸盐缓冲液洗涤,
7、然后将沉淀再溶解于10倍体积的pH8.6的0.05mol巴比妥/巴比妥钠缓冲液中,置37℃30min,进行免疫电泳或免疫固定电泳进行型别鉴定(三)注意事项1.部分单克隆冷球蛋白可在低于10℃时发生沉淀,故取标本时要保温2.部分冷球蛋白在冷的条件下可迅速沉淀,但有的需要数天,故此应放置一周3.正常人血清也可含有冷球蛋白,但属多克隆冷球蛋白的性质,且含量低4.冷纤维蛋白原、C反应蛋白-蛋白复合物和肝素沉淀蛋白等也具有冷沉淀特性,实验时应加以区别思考题:1.IgG、IgA、
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