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1、虎杖中虎杖苷的微生物发酵转化研究摘要:从中药材虎杖中筛选到一株具有转化虎杖苷能力的根霉菌株T-34,利用该菌株产生的B-葡萄糖苷酶能将虎杖苷转化为白藜芦醇.虎杖的液体发酵动力学研究结果显示:根霉菌T-34能够直接利用虎杖煮提液中的碳源、氮源等作为其生长所需的营养,并且产生的B-葡萄糖苷酶与底物虎杖苷的转化具有相对应的关系,用HPLC测得虎杖苷的转化率达98%.关键词:微生物转化;虎杖;虎杖苷;白藜芦醇;B-葡萄糖苷酶BiotransformationofpolydatinfromPolygonumcuspidatumb
2、yRhizopussp.T-34Abstract:Rhizopussp.T-34,isolatedbystrain-screeningtest,couldtransformpolydatinintoresveratrolduringfermentationofPolygonumcuspidatuminthisexperiment.Kineticsoffermentationwasstudiedtofollowthetransformationprocess,andtheresultssuggestedthatRhizo
3、pussp.T-34couldutilizecarbonre-source,nitrogenresourceandetcdirectlyasitsnutrition,furthermore,B-glucosidaseproducedbythestrainwascorrespondinglyrelatedtothetransformationofpolydatin,andthetransformationrateofpolydatincouldreach98%.Keywords:microbialtransformati
4、on,Polygonumcuspidatum,polydatin,resveratrol,B-glucosidase1引言虎杖始载于5名医别录6,为蓼科植物虎杖的干燥根茎,主要有效成分为二苯乙烯类和蒽醌类化合物,前者包括白藜芦醇及其糖苷[1].据报道白藜芦醇具有抑制肿瘤、抗氧化、抗自由基、抗血栓、抗过敏、抗动脉粥样硬化和具有冠心病、缺血性心脏病、高血脂症的防治作用,白藜芦醇已被列为抗心血管、抗癌最有前途的药物之一[2].干燥虎杖根茎中白藜芦醇含量仅为0.1%~0.2%,而虎杖苷含量约为2%左右[3],虎杖苷可在肠道中被
5、糖苷酶分解释放出白藜芦醇,发挥其药理作用[4].目前有研究用酸水解法对虎杖苷进行分解[5],但是酸碱会造成环境污染,降低产量,因此不宜用化学法进行水解.也有用改性纤维素酶直接对虎杖苷进行分解[6],但成本较高、工艺较为复杂,不利于推广应用.本项研究采用微生物发酵法转化虎杖苷,即没有强烈的酸碱反应发生,又无需粗提苷,有效的避免了上述两种方法存在的缺陷.因此利用专一微生物进行发酵是提高虎杖中白藜芦醇含量的有效2008年4月beconsistentwithinthesamedisk.Alternateunifiedcorer
6、equirementsplacedontheterminalstripterminals,onlineidentityandensurethecoppercoreisnotexposed.6.4.6enclosurewithinthesametothecablecoreprovidesbindingintoacircle,harnesstiespacingisgenerally100mm;branchofficesshallbebindingonbothends,eachcore第45卷第2期四川大学学报(自然科学版)
7、JournalofSichuanUniversity(NaturalScienceEdition)Apr.2008Vol.45No.2途径之一.2材料和方法2.1材料2.1.1仪器和试剂虎杖购于成都同仁堂药房,并经成都中医药大学药用植物鉴定室鉴定为蓼科植物虎杖的根茎.白藜芦醇标准品(购于成都思科华有限责任公司),高效液相色谱仪(美国Waters公司),Tu-1800紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司),GBRT全自控10L发酵罐(烟台高新区海洋生物工程研究所).2.1.2培养基初筛平板:主要成分为0.2%
8、NaNO3,0.1%K2HPO4,0.05%KCl,0.05%MgSO4,0.01%FeSO4,1%虎杖苷.发酵培养基(复筛培养基):主要成分为虎杖煮提液.2.2方法2.2.1菌种的筛选取自然长菌的虎杖粉1g,加入20mL的无菌水,摇匀,静置片刻,取上清液0.5mL梯度稀释,各吸取0.2mL于初筛平板上按常规涂布方法30e培养3~
