细菌分类鉴定第三部分

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1、Topic:DepartmentofMicrobiologyFaculity:XiancaiRaoClassificationandidentificationofBacteriaSection6IdentificationofBacteriaRobertKochisoneofthetwofoundersofmodernbacteriology.Bornon11December1843,inGermany,Kochwasoneofthirteenchildren.Hisfatherwasaminin

2、gofficial.Hegrewuptobeanavidchessplayer,anadmirerofJohannGoetheandaboveallabrilliantscientificinvestigator.HeobtainedamedicaldegreefromtheUniversityofGottingen,in1866,afterstudyingfirstlynaturalscienceandthenmedicine.Koch'spostulatesIn1905KochwontheNob

3、elPrizeforPhysiologyorMedicine"Forhisinvestigationanddiscoveriesinrelationtotuberculosis".微生物鉴定的方法不同的微生物往往有自己不同的重点鉴定指标。1、细胞的形态和习性水平观察细胞的形态特征、运动性、酶反应、营养要求和生长条件等。2、细胞组分水平细胞组成成分例如细胞壁成分，细胞氨基酸库，脂类，醌类，光合色素等的分析。3、蛋白质水平氨基酸序列分析、凝胶电泳和各种免疫标记技术。4、核酸水平核酸分子杂交，G+Cmol

4、％值的测定，遗传信息的转化和转导，16S或18SrRNA寡核苷酸序列分析，重要基因序列分析和全基因组测序等。常规鉴定工作步骤：1、获得该微生物的纯种培养物；2、测定一系列必要的鉴定指标；3、查找权威性的鉴定手册。一、微生物鉴定中的经典方法指长期以来在微生物常规鉴定中普遍采用的一些形态、生理、生化、生态、生活史、血清学反应等指标。经典分类鉴定法----条目分类法一百多年来进行微生物分类的传统方法。其特点是人为地选择几种形态生理生化特征进行分类，并在分类中将表型特征分为主、次。一般在科以上分类单位以形态

5、特征、科以下分类单位以形态结合生理生化特征加以区分。最后，采用双歧法整理实验结果，排列一个个的分类单元，形成双歧检索表A.能在60℃以上生长B.细胞大，宽度1.3~1.8mm……1.热微菌属(Thermomicrobium)BB.细胞小，宽度0.4~0.8mmC.能以葡萄糖为碳源生长D.能在pH4.5生长………2.热酸菌属(Acidothermus)DD.不能在pH4.5生长……3.栖热菌属(Thermus)CC.不能以葡萄糖为唯一碳源……4.栖热嗜油菌属(Thermoleophilum)AA.不能

6、在60℃以上生长双歧法检索表例样二、微生物鉴定中的现代方法（一）通过核酸分析鉴定微生物（二）细胞化学成分用作鉴定指标（三）数值分类法（统计分类法）1.DNA的碱基组成(G+Cmol%)DNA碱基因组成是各种生物一个稳定的特征，即使个别基因突变，碱基组成也不会发生明显变化。分类学上，用G+C占全部碱基的克分子百分数(G+Cmol%)来表示各类生物的DNA碱基因组成特征。（一）通过核酸分析鉴定微生物1）每个生物种都有特定的GC%范围，因此后者可以作为分类鉴定的指标。细菌的GC%范围为25--75%，变化

7、范围最大，因此更适合于细菌的分类鉴定。2）GC%测定主要用于对表型特征难区分的微生物作出鉴定，并可检验表型特征分类的合理性，从分子水平上判断物种的亲缘关系。测定方法:Tm法:G+Cmol%=(Tm-53.9)×2.443）使用原则：G+C含量只能说明其DNA的含量,不说明顺序,故主要用于微生物分类鉴定中的否定每一种生物都有一定的碱基组成，亲缘关系近的生物，它们应该具有相似的G+C含量，若不同生物之间G+C含量差别大表明它们关系远。但具有相似G+C含量的生物并不一定表明它们之间具有近的亲缘关系。例如:

8、微球菌G+C70%,葡萄球菌35%----不同又如:假单胞菌58~70%,然而有8~9种为35%,分类手册第8版中增加一个属:Artiromana(另单胞菌)同一个种内的不同菌株G+C含量差别应在4～5%以下；同属不同种的差别在5～15%；15%以上---不同属.G+C含量已经作为建立新的微生物分类单元的一项基本特征，它对于种、属甚至科的分类鉴定有重要意义。若二个在形态及生理生化特性方面及其相似的菌株，如果其G+C含量的差别大于5%，则肯定不是同一个种，大于15%则肯