骨水泥阻塞髓腔后骨内压升高对远侧关节影响的实验研究论文

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1、骨水泥阻塞髓腔后骨内压升高对远侧关节影响的实验研究论文李宏宇，安洪，梁斌，李荣祝，田文，韦敏克【摘要】［目的］探讨骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔后骨内压升高对远侧关节组织结构的影响。［方法］将26只实验兔分成4组，随机取出8只不做模型而作为正常对照组，其余18只采取左侧股骨髓腔内灌注聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）骨水泥而右侧不灌注,制作骨水泥阻塞股骨近中段骨干髓腔的动物模型.freela公司），HE（美国E.M.Chemicals公司）。国产聚甲基丙烯酸甲酯（polymethylmethacrylate）TJ骨水泥（天津市合成材

2、料工业研究所生产），16#上颌窦穿刺针（外径1.6mm,内径1.05mm,长80mm），日本Olympus公司光学显微镜（BH2型，LM），日本Hitachi公司透射电子显微镜（H600，SEM）。1.2动物模型建立方法和分组采用兔左侧股骨髓腔内灌注骨水泥而右侧作为对照侧的方法。肌注速眠新麻醉后（0.15ml/kg），俯卧位固定在特制卡压式兔手术台上，采用髋后外方入路，根据兔存在第3转子这个特殊的解剖结构，从股骨后外方肌间隙进入，在第3转子上方仅切除大转子外侧部分而不打断股骨颈，暴露转子间窝，找到骨髓腔入口，用自制的大小

3、合适、粗细不同的髓腔锉反复扩髓后（深度为股骨长度的1/2），反复冲洗创面，冲出破坏的骨髓组织，沙布条沾干。按粉、液比2：1比例调配骨水泥（PMMA），持续手工搅拌，待聚合至面团状态后使用，为避免PMMA填入股骨骨髓腔后深度无法控制，首先将一小块面团状PMMA作成髓腔大小塞状物,用器械轻轻填入髓腔内至股骨中段狭窄处，作为髓腔塞，待10minPMMA基本固化后，再将其重新调配好（方法同上）呈面团状PMMA，用器械填入股骨髓腔内，直至填满为止。待PMMA完全固化后，缝合关闭切口。将26只实验兔分成4组，除随机取出8只不做模型作为正

4、常对照组外，其余18只均按照上面方法制作骨水泥阻塞骨干髓腔的动物模型，根据不同的观察时间段随机分成术后4（T4）、8（T8）及16周（T16）3个观察组，每组6只。1.3标本收集方法处死正常兔8只，术后4、8及16周组模型兔各6只。其中一半动物取左侧股骨远端关节软骨、软骨下骨、滑膜标本，进行HE染色、甲苯胺蓝染色和免疫组织化学处理，光镜观察。而另一半动物取左侧股骨远端关节软骨、软骨下骨标本，行透射电镜观察。1.4普通HE染色方法取出标本放入10％甲醛固定48h，8％EDTA脱钙3～4周，乙醇逐级脱水，二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明，有机溶

5、液浸泡，石蜡纵向包埋，切片机将石蜡块切成4μｍ厚的薄组织切片，普通HE染色，光镜观察。1.5甲苯胺蓝染色方法切片脱蜡,二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明，乙醇逐级脱水，水洗，甲苯胺蓝染色20min，水洗，乙醇逐级处理，二甲苯Ⅰ、Ⅱ透明，中性树胶封片（蓝染），光镜观察。1.6免疫组织化学检测方法切片脱蜡；3％过氧化氢室温孵育10min；水洗；PBS浸泡5min；0.05%胰蛋白酶37℃消化20min；PBS浸泡3次,每次5min；10％正常山羊血清封闭，室温孵育10min；倾去血清，滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育60min；PBS冲洗3次,

6、每次5min；滴加适当比例稀释的生物素标记二抗，37℃孵育30min；PBS冲洗3次,每次5min；滴加适当比例稀释的辣根过氧化物酶标记的链酶卵白素，37℃孵育30min；PBS冲洗3次,每次5min；DAB显色，自来水冲洗，苏木素复染，酸酒精分色；中性树脂封片；光镜观察。1.7透射电镜样品制备方法取出标本放入2.5％戊二醛前固定，8％EDTA脱钙3～4周，乙醇逐级脱水，纯丙酮脱水2次，环氧树脂812：丙酮（1∶1）浸透，纯包埋液浸透后固化，超薄切片机切片，铀-铅染色，透射电镜观察。2结果2.1普通HE染色观察结果2.1.1

7、关节软骨组织对照组软骨表面光滑、平整，分层清晰，软骨细胞排列呈柱状，分布均匀，核大小均匀，着色深，胞浆染色浅，潮标线完整；造模4周软骨表面基本平整，厚度稍减小，软骨细胞排列不规则，分布不均匀，数量减少，潮标线前移、紊乱；造模8周软骨表面不平整，软骨层明显变薄，软骨细胞排列紊乱，有大量的簇聚软骨细胞，数量明显减少，少量细胞坏死，潮标线不清晰或部分断裂；造模16周软骨层明显变薄，表层缺失，呈虫蚀样改变，有深至软骨下骨的裂隙，内见炎性细胞浸润，软骨细胞排列紊乱，数量明显减少，大量细胞坏死，潮标线紊乱或部分缺失。2.1.2软骨下骨组

8、织对照组骨小梁结构正常，骨细胞排列良好，结构完整，板层线清晰；造模4周骨小梁轻度增厚，结构基本正常，部分骨细胞核浓染，空骨陷窝不明显；造模8周骨小梁明显增厚，可见空骨陷窝形成，板层线模糊；造模16周骨小梁形成大量空骨陷窝，部分结构断裂，断裂处有成骨修复现象，骨细胞数量明显减少，板层线消失。