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1、1.生物大分子常见分离方法及其原理答：制备生物大分子的分离纯化方法多种多样，主要是利用它们之间理化性质的差异。根据作用原理生物大分子的分离、纯化可分为以下几种类型：（1）根据分子极性大小和溶解度的不同，如溶剂提取技术、盐析法、分配层析法、分级沉淀法等；（2）根据分子形状和大小不同，如凝胶过滤层析等；（3）根据物质吸附性质不同，如选择性吸附与吸附层析法等；（4）根据分子带电性（电离性质）的差异，如离子交换层析、电泳、等电聚焦法等；（5）根据配体特异性，如亲和层析。1.沉淀法：根据不同物质在溶剂中的溶解度不同而达到分离的效果，不同溶解度的产生是由于溶质分子之间及溶质
2、与溶剂分子之间亲和力的差异而引起的，溶解度的大小与溶质和溶剂的化学性质及结构有关，溶剂组分的改变或加入某些沉淀剂以及改变溶液的pH值，离子强度都会使溶质的溶解度产生明显的改变。2.离心法：利用混合液中具有不同密度且互不相溶的液相和固相，在离心力场或重力场中获得不同的沉降速度的原理，达到使液体中固体颗粒沉降的目的。3.吸附层析：通过吸附剂表面与被分离物质之间的范德华力和静电引力的大小不同，来达到分离的目的。4.凝胶过滤层析：凝胶是一种多孔性的不带表面电荷的物质，当带有多种成分的样品溶液在凝胶内运动时，由于它们的分子量不同而表现出速度的快慢，在缓冲液洗脱时，分子量大
3、的物质不能进入凝胶孔内，而在凝胶间几乎是垂直的向下运动，而分子量小的物质则进入凝胶孔内进行“绕道”运行，这样就可以按分子量的大小，先后流出凝胶柱，达到分离的目的。5.亲和层析：亲和层析是利用偶联亲和配基的亲和吸附介质为固定相亲和吸附目标产物，使目标产物得到分离纯化的液相层析法。亲和层析操作与一般的固定床吸附操作方式相同，多采用断通式前端分析法。6.等电聚焦法：等电聚焦的特点就在于它利用了一种称为两性电解质载体的物质在电场中构成连续的pH梯度，使蛋白质或其他具有两性电解质性质的样品进行聚焦，从而达到分离、测定和鉴定的目的。2.生物大分子高级结构测定及预测方法蛋白质
4、高级结构的测定：（1）X射线单晶衍射分析，（2）NMP分析，（3）蛋白质二维结晶及其电子晶体学的结构分析，（4）蛋白质溶液构象的光谱技术。预测方法：①同源模建(HomologousModeling)：是目前应用较成功的一种方法。蛋白质根据序列同源性可以分成不同的家族,序列同源性大于30%的蛋白质可能由同一祖先进化而来,称为同源蛋白质；优点：同源蛋白质通常具有相似的结构和功能,所以利用结构已知的同源蛋白质可以建立待预测序列的结构模型,然后用理论计算进行优化；缺点：但是对于序列同源性小于30%的蛋白质,则难以建立理想的同源模建模型。要求有结构已经测定的蛋白质的结构作
5、为模板,而且不能产生全新结构；②折叠识别方法：人们对结构已知的蛋白质研究发现,大量序列同源性较差的蛋白质存在相同的折叠类型,从而折叠识别方法成为蛋白质结构预测的另一种重要方法。即假设有N种已知的折叠子,以它们作为模板,将目标序列与这些模板一一匹配,得分最高的被认为是序列最可能采取的结构。优点：同源性较差的蛋白质也能建立理想的同源模建模型。缺点：要求有结构已经测定的蛋白质的结构作为模板,而且不能产生全新结构；③从头预测：包括蛋白质结构类预测、蛋白质二级结构预测、超二级结构预测、蛋白质三维结构的预测；优点：不需要序列以外的其它更多信息,从一条蛋白质序列出发,就可得到
6、蛋白质的空间结构,在理论上这是一种较为理想的方法。缺点：蛋白质结构复杂性阻碍着从头预测方法的实现。3.pathway含义及其构建方法Pathway：就是细胞的物质成分或遗传成分之间的一组相互作用或功能关系,这些组成成分协调动作完成一种生物过程.Pathway是在系统水平上完成生物某一功能的基本单元(或局部子网络),生物过程的完成是一些特定的Pathway的功能实现以及它们之间相互作用的结果,因此,Pathway属于系统生物学的研究范畴,是后基因组时代各类组学研究的基础.Pathway是细胞中共同完成一个生物过程的一系列生物分子之间的相互作用或功能关系，主要包括代
7、谢pathway、信号pathway、调控pathway三类，它们是细胞的增殖、分化、代谢、凋亡等过程的重要调控方式.Pathway构建方法：(1)基于已识别出来的Pathway的比对;(2)计算预测与生物实验相结合确定信号和调控Pathway源基因与目的基因之间的关系;(3)基于分子相互作用网络挖掘子模式。(4)采用因果关系检验法建立基因间的因果关系,然后通过最小生成树搜索构建Pathway4.蛋白质组学研究流程和方法蛋白质组学研究流程主要为以下四方面：（1）蛋白质标本的制备及分离，（2）蛋白质图像的差异对比分析，（3）差异蛋白肽段的鉴定，（4）蛋白质数据库的
8、搜索分析。蛋白质组学研究
