肿瘤微卫星异常改变的研究进展

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1、肿瘤微卫星异常改变的研究进展【摘要】微卫星的异常改变被认为是肿瘤发生的另一机制，MSI和LOH是影响肿瘤临床病理特性的重要因素。微卫星的检测技术简便易行，它可以用于判断预后，检测癌前病变组织。全文就近几年肿瘤微卫星异常改变的有关文献，阐述了MSI和LOH在肿瘤发生发展过程中的作用，及其在癌前病变监测和肿瘤防治中的临床意义。【关键词】肿瘤现代肿瘤分子生物学研究证实，人类肿瘤的本质是一种基因病，其发生机制十分复杂，涉及一系列遗传学改变。微卫星是广泛分布于生物基因组中的DNA重复序列，与许多重要基因紧密连锁[1]。近年来，微卫星分析作为一个敏感的遗传指标，成为肿瘤研究的新

2、热点，现就国内外关于综述如下。1微卫星及微卫星异常改变微卫星是一种由2~6个核苷酸组成的具有高度多态性的简单串联排列的DNA序列，是一类高度多态性的遗传标记。微卫星序列定位于基因的启动子、基因编码区、内含子及其与外显子交界区，通过改变DNA结构或与特异性蛋白结合而发挥其基因调控作用。据估计，人类基因组携带至少10万个微卫星，约有1000个标志物覆盖人类所有染色体，可由数据库获取。微卫星异常是基因组不稳定的重要分子标志。主要表现为：①微卫星不稳定性(microsatelliteinstability，MSI)；②杂合性丢失。MSI是指肿瘤组织与其相应非肿瘤组织相比，其

3、结构性等位基因的大小发生改变，即微卫星重复单元的增加和丢失。在扩增片段长度多态性分析中，表现为肿瘤组织DNA出现而非肿瘤组织中不出现的额外的带，或肿瘤的一个等位基因与非肿瘤组织相应等位基因相同，而另一等位基因的位置发生改变。肿瘤中微卫星的LOH比MSI更常见，是指一个位点上两个多态性等位基因中的一个出现突变或缺失。通过检测肿瘤细胞染色体上某一区域等位基因位点的缺失，常被用来寻找并定位与肿瘤发生相关的肿瘤抑制基因。目前认为MSI的产生有2种机制[2]：①DNA多聚酶的滑动导致重复序列中1个或多个碱基的错配；②MS同源重组导致碱基对的丢失和插入。现在的研究结果倾向于前一

4、机制。肿瘤组织MSI的诊断目前尚无统一标准。1996年的一个国际会议上对HNPCC及散发性结肠癌MSI判定拟定了1个推荐的标准，在推荐BAT-25、BAT-26、D5S364、D2S125、D17S240这5个MS位点中，当有≥2个位点出现不稳定，为高频率MSI；出现1个位点不稳定为低频率MSI；无位点不稳定时判定为肿瘤微卫星稳定[3]。LOH是以肿瘤组织中微卫星DNA两种等位基因的相对强度与正常组织的等位基因相对强度的比值作为判定依据，RF＜或＞时，表示该位点发生了LOH。目前检测微卫星多态性均采用以PCR为基础的方法。以往微卫星检测利用同位素标记引物、电泳、放射

5、自显影法，该法复杂而繁重。现在国内外多数实验室多采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳—银染方法显示分析结果，其优点在于经济、方便、检测灵敏度较高。但随着PCR技术的完善和分子生物学技术的不断发展，微卫星检测方法不断更新。毛细血管电泳技术是一项成熟的技术，具有操作简便，分辨率和自动化程度高的特点，使大规模、高通量的全基因组扫描得以实现，在基因组研究中已成为一种趋势[4]。荧光标记多重PCR法是采用FAM、TET和AEX种不同颜色的荧光染料标记微卫星引物，采用多重PCR方法，将多种引物混合，放入同一管中进行PCR扩增，将PCR产物变性后在同一加样孔中电泳，然后进行测序，软件分析，

6、该法敏感、省时、高效[5]。MSI和LOH参与肿瘤发生发展通常情况下，体细胞中小卫星DNA基因的突变频率为5×10-2，而微卫星DNA的突变频率为10-7~10-5，因此，微卫星DNA的稳定性可作为衡量细胞基因组整体稳定性的良好标记，并广泛用于肿瘤基因组不稳定性的研究，LOH提示肿瘤抑制基因的缺失和失活，与MSI共同被认为是基因组不稳定的两个主要表型特征，在肿瘤的多步骤发生过程中起着重要作用。产生MSI的主要原因是错配修复。Zhu等[9]利用在乳腺癌中有较高发生率的7个染色体臂的11个微卫星位点，对46例乳腺疾病，包括乳腺增生/乳头状瘤及乳腺癌患者进行微卫星检测，在

7、22例微卫星改变阳性患者中进行乳头抽吸液的MSI及LOH检测，其中P/Pap患者的NAF中LOH/MSI检测阳性率为33%，乳腺癌患者中为43%。证明这一方法可有效检测乳腺癌，NAF中微卫星改变检测可代替在乳腺组织中的检测，成为乳腺癌前病变的重要提示。Rucinska等[10]对20例肉瘤患者的切除标本及其正常组织进行微卫星检测后得出在高级别肉瘤中，位于12P上的位点均检测到MSI，在2号染色体发现有75%的高级别肉瘤有LOH存在，而在低级别肉瘤中未发现LOH/MSI，利用这一技术有可能作为鉴别恶性或是非恶性损伤的一个诊断标准。VassilakisDA等[11]