尿脱落细胞6号染色体长臂的微卫星改变诊断膀胱肿瘤论文

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1、尿脱落细胞6号染色体长臂的微卫星改变诊断膀胱肿瘤论文成凡，楚雍烈，贺大林，杨林，陈萍，杨娥【关键词】膀胱肿瘤【Abstract】AIM：Toinvestigatethemicrosatellitealteration(MA)atchromosome6qintheearlydiagnosisofbladdertumorandtostudyentofbladdertumor.METHODS：D6S404andD6434microsatellitemarkersnear6q21ethodinboththeurinesedimentDNAandtumorDNAfrom31c

2、asesofbladdertumor.RESULTS：Amongthe31casesofbladdertumor,64.5%ofthetumortissueDNAand581%oftheurinesedimentsDNAshoorcaseshadnochangesateitherofthetor.LOHortissuesonsiteforD6S404(355%)andD6S434(226%).CONCLUSION：Microsatelliteanalysisofurinesedimentsisofsignificanceintheearlydiagnosisofbl

3、addertumorandtheremaybesometumorsuppressorgenerelevanttothedevelopmentofbladdertumornear6q21.【Keys;urinesediment;microsatellitealteration;chromosome6q【摘要】目的：探讨尿脱落细胞6q的微卫星改变(MA)在膀胱肿瘤早期诊断中的应用价值，并研究6q的杂合性缺失（LOH）与膀胱肿瘤的关系.方法：应用6q21区域附近D6S404，D6S434微卫星标志.freelicrosatellitealteration,MA）是肿瘤的常

4、见现象，包括微卫星不稳定性（microsatelliteinstability,MSI）和杂合性缺失(lossofheterozygosity,LOH).对膀胱肿瘤MA进行研究发现，其MA常见于9号染色体，显示与肿瘤的发生关系密切.在其他肿瘤研究中注意到，6号染色体长臂（6q）MA与肿瘤的关系甚为重要，发现了一些抑癌基因.膀胱肿瘤细胞6q上MA的研究，国外刚刚起步，国内尚无研究报道，值得深入研究.1材料和方法1.1材料膀胱肿瘤患者31例，取肿瘤标本,术前膀胱冲洗液及外周血.G1，G2，G3级肿瘤分别为17，8，6例；PTa，PT1，PT2，PT3分别为2，20，4，

5、5例.同时收集10例非膀胱肿瘤患者的血,尿作为对照.DNA提取纯化试剂盒购自上海Sangon生物工程技术有限公司（Tab1).表1微卫星引物序列及定位（略）Tab1Primersequencesformicrosatelliteloci（略）1.2方法基因组DNA的制备参照DNA提取纯化试剂盒说明.选择染色体6q21区域附近D6S404，D6S434两个微卫星位点，引物序列通过NCBI数据库获得，由上海Sangon生物工程技术有限公司合成.PCR扩增反应体系50μL，DNA模板30～50ng.反应参数为:94℃预变性4min；94℃50s，58℃50s，72℃60s

6、，共30个循环；72℃充分终延伸5min.PCR扩增产物用20gL-1琼脂糖凝胶电泳检测.变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染显示带型，制作干胶片.将血,尿及肿瘤组织DNA的PCR产物同时比较,以血为正常对照，当尿或肿瘤组织的某一位点电泳条带增加，带的移动或带的密度增加，记为MSI；若某一位点出现等位基因条带的消失或相对密度减少50%以上，则记为LOH.2结果膀胱肿瘤患者尿脱落细胞中MA阳性率达581%，其中MSI发生率226％，LOH发生率484％，显著高于同期进行的尿细胞学检查阳性率105%；10例对照无一例出现MA；肿瘤组织DNAMA阳性率645%，其中MSI发生率2

7、26%，LOH发生率516%，D6S404LOH率355%，D6S434LOH率226%.变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳图谱见Fig1.利用Fisher精确概率法检验G1与G2,G3级肿瘤之间MA阳性率无差异，检验浅表型肿瘤（Ta,T1合并）与侵袭型肿瘤（T2，T3合并）之间无差异.B：Blood；U：Urinesediment；T：Tumor.→：LOH；：MSI.图1变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳图谱（略）Fig1MapofPCRSSLP（略）3讨论尿脱落细胞微卫星分析诊断膀胱肿瘤较方便［２，３］.膀胱肿瘤MA常见于9号染色体，且多为早期肿瘤，近来6号染色体与膀胱肿