粪便涂片法检查菌群失调标准操作规程

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1、口服四联活菌肠溶胶囊临床研究SOP粪便涂片法检查菌群失调标准操作规程一、革兰染色液的配制（科氏改良法）共5种液体，分为结晶紫A液，结晶紫B液，革兰碘液，脱色液，复染液。染液名称配制方法1结晶紫A液结晶紫0.25g（研磨后），加乙醇（2ml，95%），再蒸馏水98ml2结晶紫B液Na2CO31.25g，加蒸馏水100ml3革兰碘液NaOH0.1g溶于2.0ml蒸馏水中，加I22.0g，KI4.0g，再加蒸馏水至100ml4脱色液丙酮30ml+乙醇70ml（95%）5复染液沙黄2.5g~3.0g加入乙醇（95%）10ml，溶解后加入蒸馏水1

2、00ml（或用10%石炭酸复红液10稀释即可）二、涂片制作1、取样：粪便标本送检时，观察标本性状，并“多位点”挑取或沾取粪便标本；2、推片与固定：以30~40度角推片，面积1~1.5×2cm，自然干燥后，酒精灯上火焰上能过3次固定（制作涂片2张，其中作为一张备用）；3、染色：第一步，先加A液淹没标本，再加“等量”B液混合，染色1分钟；水轻柔冲洗掉；第二步，加革兰碘液，1~2分钟；水轻柔冲洗掉；第三步，加脱色液20秒到30秒，根据情况而定，如涂片稍薄时就适当减少染色时间；水轻柔冲洗掉；第四步，最后复染30秒，冲洗后晾干或吸干。4、涂片制作

3、注意要点：1、涂片不可太厚，亦不可太薄，太厚则细菌总数增加，且影响观察，太薄则涂片所见细菌总数减少，厚薄如血膜为宜。2、注意把握染色时间，好的染色是能够清晰准确观察的必要条件。locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfa

4、tal,whennightcame第3页共3页口服四联活菌肠溶胶囊临床研究SOP三、镜下观察1、确定涂片和染色情况：涂片要均匀，菌体不变形，革兰阳性和革兰阴性反差要好。2、总览细菌总数：观察总数的多少，以及有无优势菌或真菌等。其评定标准见《肠道粪便检查图谱》。3、观察G+杆菌、G+球菌、G-杆菌、G-球菌比例：选定有代表性的视野，计数并判定其大概比例（有经验者可根据经验判定）。计数方法可选用纸片打孔缩小视野计数法来计数；亦可选定有代表性视野，数一定数量的细菌，再计数各种比例。四、结果判定:请按照下表进行参照填写每个患者的菌群失调化验单（

5、四联活菌肠溶胶囊临床试验专业）正常参考值评定参考标准分析结果（检验师填写）I度失调Ⅱ度失调Ⅲ度失调大便性状正常成形或成型软便正常成形或不成形软便、稀便多数为程度不等的稀便，也可为粘液便、水样便、脓血便或柏油样便多数为程度不等的稀便，也可为粘液便，常呈黄绿色或黑色涂片所见细菌总数500～5000/油镜视野（计数5个油镜视野细菌数的均值）细菌总数在正常范围（501~5000/HP）、正常低值或略有减少（101~500/HP）细菌总数明显减少（11~100/HP）或无明显改变细菌总数呈显著减少（＜10HP）革兰阳性杆菌50.2%-74%革兰阳

6、性杆：革兰阴性杆：革兰阳性球：革兰阴性球=50-74：35-44：2-10：0.5-5正常范围低值革兰阳性杆：革兰阴性杆：革兰阳性球：革兰阴性球=≤50：45-50：13-30：5-10明显减少革兰阳性杆：革兰阴性杆：革兰阳性球：革兰阴性球=35-40：＞50：＞30：＞10细菌总数呈显著减少，粪便中原来的菌群大部分成员被抑制而消失革兰阴性杆菌35.29%-44%多数会稍有增加革兰阳性球菌2%-10%正常范围高值或增多革兰阴性球菌0.5-5%杆菌：球菌≧3:11:1～2:1locatedintheTomb,DongShenJiabang

7、,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame第3页共3页口服四联活菌肠溶胶囊临床研究SOP（杆菌＝革兰阳性杆菌＋革兰阴性杆菌）（球菌＝革兰阳性球菌＋革兰阴性球菌）可能会出现比例倒置镜下印象：1.肠道菌群未见明显异常2.I度菌群失调改变3.II度菌群失

8、调改变4.Ⅲ度菌群失调改变五、其它说明：1、尽量用新鲜粪便进行检测，时间半小时之内，如果耽搁时间较长，可以取稍微量多的粪便样本，取样时挑取中心位置的粪便。2、遇粘液便，胨样便或水样便亦可采用牙签进涂片。3、