程景 实习报告 定稿(1)

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1、专业实习总结动物科技学院动医071班17号程景一、实习的基本概况我于2011年3月1日至2011年5月20日在山西农业大学动物科技学院兽医临床实验室实习，期间由李宏全老师担任实习指导教师。在这段时间里，我参与了实验室的一些日常工作，培养了自己的动手能力，还帮忙其它实验的完成，培养自己的科学思维，同时在老师的指导下完成了毕业论文，掌握了论文的写作模式、方法和思路。二、实习感受（一）成绩与收获1、对PCR的了解PCR是聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）的简称，是一种体外酶促合成特异DNA片段的专用仪器，在人工合成引物介导下反复进行热变形-退火-延伸而扩增D

2、NA的循环过程。因其具有特异性强，灵敏度高，对标本的纯度要求低，简便、快速等特点，PCR技术迅速成为分子生物学的一项常规手段，并得到了广泛的实际应用。PCR方法模仿体内DNA复制过程，首先使DNA变性，两条链解开，即将模板DNA置于94—95℃的高温下，使双链DNA的双链解开变成单链DNA；然后使引物模板退火，将反应体系的温度降低到45—65℃左右，引物能分别与变性后的两条模板链碱基互补配对；将反应体系调整到DNA聚合酶作用的最适温度，DNA聚合酶随即以4种dNTP为底物，在引物的引导下合成与模板互补的DNA新链。重复此过程，DNA即以指数方式扩增。1988年耐热的TaqDNA聚合

3、酶在栖热水生菌中被分离出来后，PCR技术逐步成熟起来。近年来，在实际工作和运用中，以基本原理为基础又发展出了很多新型的PCR技术。如：反向PCR(InversePCR)用于扩增位于已知序列两侧的一段未知序列；不对称PCR(AsymmetricPCR)通过在反应体系中加入不等量的一对引物从而获得单链产物；重组PCR(RecombinantPCR)可以把两个不相邻的DNA片段重组在一起的PCR法。除此之外还有套式引物PCR(NestedPrimerPCR)、免疫PCR(Immuno-PCR)、复合PCR(MultiplexPCR)、锚定PCR(AnchoredPCR)、玻片PCR(Sl

4、ide-PCR)、加端PCR(Add-PCR)、捕捉PCR(CapturePCR)、任意引物PCR(ArbitrarilyPrimerPCR)、等位基因特异性PCR(Allele-specificPCR)、原位PCR(InsituPCR)等。逆转录PCR(ReverseTranscriptionPCR,简称RT-locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(Wuzhensaidinformatio

5、nisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcamePCR)。逆转录PCR是一种能检测细胞内低丰度特异性RNA的方法。其原理是原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。RT-PCR主要用于对表达信息进行检测或定量，分析基因的转录水平。另外，这项技术

6、还可以用来检测基因表达差异或克隆cDNA而不必构建cDNA文库。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA分析技术，更灵敏，更易于操作。2、对红细胞免疫的了解以往认为，红细胞只参与呼吸功能，没有免疫功能。事实上，红细胞有许多与免疫有关的物质，如CR1、CR3、CD58、CD59、DAF、SOD，数目众多，自成系统。红细胞是血循环中最重要的固有免疫细胞。红细胞有识别、黏附、浓缩、杀伤抗原、清楚循环免疫复合物的能力，参与机体免疫调控，并有完整的自我调控系统，许多疾病免疫发病机制中，红细胞天然免疫缺陷占有很重要的地位。已有越来越多

7、的研究证实红细胞天然免疫功能的变化与许多疾病的发生、发展及病理过程密切相关，尤其是E-CR1基因多态性分布及其表达变化与许多疾病的发生发展关系密切，如自身免疫性疾病、传染病、血液病等。20世纪50年代，Nelson等首次发现了红细胞具有免疫黏附功能，此功能有促进白细胞吞噬的作用。人红细胞能与特异调理过的梅毒螺旋体及肺炎球菌结合，从而推测红细胞膜存在兔免疫黏附受体，免疫复合物同该受体结合，促进白细胞对其的吞噬，是宿主防御机制的一部分。20世纪60年代证实了这种人红细胞所