中南 博士研究生分子生物题目总结

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1、1.什么是RNAi干扰？简述RNAi技术原理和应用前景与靶基因同源的双链RNA诱导的特异转录后基因沉默现象。其作用机制是双链RNA被特异的核酸酶降解，产生干扰小RNA(siRNA)，这些siRNA与同源的靶RNA互补结合，特异性酶降解靶RNA，从而抑制、下调基因表达。已经发展成为基因治疗、基因结构功能研究的快速而有效的方法。RNAi在探索基因功能，基因治疗领域中的应用，RNAi在整形外科领域的应用前景，病毒性疾病的治疗，遗传性疾病的治疗，肿瘤病的治疗，在植物学中的应用。2.基因定点诱变技术？举例说明在蛋白质工程中的应用。　

2、基因定点诱变（Site-directedmutagenesis），是在体外特异性地取代、插入或缺失DNA序列中任何一个特定碱基的技术,包括盒式取代诱变、寡核苷酸引物诱变及PCR定点诱变等（一）原理两种PCR产物序列一端重叠，均含有PCR引物引入的突变位点。除去未参入的多余引物，两种产物变性混合，可形成了凹端的异源双链。这种凹分端可由TalDNApol延伸产生一个两重叠产物的重组体。该重组体可由两片段的外测引物进行PCR扩增，因此可产生一种远离片段末端的突变体。1.盒式诱变利用一段人工合成的具有突变序列的寡核苷酸片段取代野生

3、型基因中的相应序列.2.寡核苷酸引物诱变使用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸片段作引物,启动单链DNA分子进行复制，随后这段寡核苷酸引物便成为了新合成DNA子链的一个组成部分。3ＰＣＲ诱变重组PCR定点诱变:大引物诱变:核心是第一轮PCR产物为第二轮PCR引物现在，几乎每个生物实验室都会用定点突变法来研究基因或蛋白质的功能。定点突变法的应用不仅广泛用于基因工程技术领域，还可用于农业培育抗虫、抗病的良种，用于医学矫正遗传病、治疗癌症等病。在蛋白质工程中的应用，加入二硫键增加蛋白稳定性，蛋白质分子中两个半胱氨酸氧化形成二硫键。

4、二硫键数量与蛋白稳定性有关，增加二硫键，可以提高蛋白质的热稳定性，有机溶剂稳定性和酸碱稳定性。3.什么是蛋白质工程？简述用途所谓蛋白质工程，就是通过对蛋白质已知结构和功能的了解，借助计算机辅助设计，利用基因定点诱变等技术，特异地对蛋白质结构基因进行改造，产生具有新的特性的蛋白质的技术，并由此深入研究蛋白质结构与功能的关系。研究的内容：利用已知蛋白质一级结构的信息作为应用。定量研究蛋白质结构与功能的关系。根据已知结构-功能的关心人工改造蛋白质。用途：通过蛋白质工程，人们可以随心所欲的改变蛋白质结构及其性质和生物学功能。例如，

5、我们可以利用蛋白质工程改变酶的Km，Vmax，酶促反应的最适温度，最适PH值提高蛋白质的稳定性，融合蛋白质，改变蛋白活性，治癌酶的改造，白质工程对抗体进行改造，在植物，农牧方面的应用研究最多，取得成果哦最显著的是生物技术药物和工业用酶的蛋白质工程。4.选择性剪接生物学意义选择性剪接（也叫可变剪接）是指从一个mRNA前体中通过不同的剪接方式（选择不同的剪接位点组合）产生不同的mRNA剪接异构体的过程，而最终的蛋白产物会表现出不同或者是相互拮抗的功能和结构特性，或者，在相同的细胞中由于表达水平的不同而导致不同的表型。在人体内大

6、约有60%的转录机制都是变为剪切，剪切变位剪切可以决定基因产生哪种蛋白质因此可以控制基因的表达。当外界环境剧烈变化的时候，机体可以通过变位剪切使基因产生特殊的蛋白质来抵抗外界变化5.Klenow的片段定义特点和用途大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的大片段Klenow片段，E.coliDNA聚合酶Ⅰ经胰蛋白酶或枯草杆菌蛋白酶部分水解生成的C末端605个氨基酸残基片段。该片段保留了DNA聚合酶I的5ˊ-3ˊ聚合酶和3ˊ-5ˊ外切酶活性，但缺少完整酶的5ˊ-3ˊ外切酶活性。它可用于填补DNA单链末端成为双链。1.Klenow大片段是一条多

7、肽链，MW76KD，保留了E.colipolⅠ的5′→3′DNA聚合酶，3′→5′外切酶活性。2.Klenow在基因工程用于：(1)补平用限制酶消化dsDNA得到的5’粘性末端（即3’延伸末端）(2)同（1），填平过程中，用32pdNTP标记DNA片段3’末端。(3)cDNA克隆了中，用于合成cDNA的第二条链。(4)在Sanger双脱氧法ddNTP系统进行序列分析6.α-互补及其产生机理载体都带有一个E.coliDNA的短区段，其中含有β-半乳糖苷酶的-α肽基因（lacZ’）的调控序列和头146个氨基酸的编码信息。这个编

8、码区中插入了一个MCS，它并不破坏读框，但是可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞，虽然宿主和质粒编码的片段各自都没有酶活性，但它们可融为一体，形成具有酶活性的蛋白，从而实现互补α-互补是指lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变