双峰驼奶对2型糖尿病大鼠肾组织结构及其细胞凋亡的影响

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1、双峰驼奶对2型糖尿病大鼠肾组织结构及其细胞凋亡的影响王雪莹,张全伟,张勇,赵兴绪*(甘肃农业大学动物医学院,兰州730070)摘要:(目的)观察双峰驼奶对2型糖尿病大鼠肾组织结构及其细胞凋亡的影响,为临床预防和治疗糖尿病及其并发症提供理论参考。(方法)通过链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)结合高糖高脂饮食诱导构建2型糖尿病(type2diabetesmellitus,T2DM)大鼠模型,糖尿病大鼠随机分为糖尿病模型组(diabetesmodelcontrol,DMC)、低剂量骆驼奶组(2ml/d)(lowcame

2、lmilk,LCM)、高剂量骆驼奶组(5ml/d)(highcamelmilk,HCM)和盐酸二甲双胍组(200mg/kg)(metforminhydrochloride,MTH),每组12只,另设正常对照组(controlgroup,C)。建模成功后,试验组处理4周后检测大鼠空腹血糖(FPG)浓度变化;采用苏木精-伊红(H&E)染色方法检查肾脏组织的病理变化;采用荧光定量Realtime-PCR法检测Bax(Bcl2-associatedXprotein,Bax)、Bcl-2(Bcelllymphoma/lewkmia-2,B

3、cl-2)、细胞凋亡蛋白酶3(cysteinylaspartatespecificproteinase3,caspase3)和核转录因子(nuclearfactor-kappaB,NF-kB)mRNA的表达丰度;采用免疫组织化学染色法和免疫印迹法观察肾脏组织凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。(结果)与DMC组相比,LCM组、HCM组和MTH组大鼠FPG浓度均显著下降(P<0.01),LCM组大鼠胰岛素敏感性指数(ISI)显著升高(P<0.01);H&E染色显示DMC组肾小球体积增大,囊腔变小,肾小球内出血严重,而LCM组

4、、HCM组和MTH组肾小球体积、囊腔间隙较正常,肾小球出血明显减少;BaxmRNA和NF-kBmRNA在DMC组中表达量最高,Bcl-2mRNA和Caspase3mRNA分别在LCM组和HCM组有较高的表达量;与DMC组相比,LCM组、HCM组和MTH组大鼠肾脏细胞Bax蛋白表达减低,Bcl-2蛋白表达升高。(结论)双峰驼奶能显著降低糖尿病大鼠肾脏损伤,抑制其细胞凋亡,对糖尿病及其并发症的治疗发挥有效作用。收稿日期:资助项目:国家863计划项目(2013AA102505-3)作者简介:王雪莹(1988-),女,河南三门峡人,硕士

5、研究生,从事临床兽医学研究。E-mail:759934977@qq.com*通讯作者:赵兴绪,教授,博士生导师,E-mail:zhaoxx@gsau.edu.cn关键词:双峰驼奶;2型糖尿病;肾脏;病理变化;细胞凋亡糖尿病(diabetesmellitus,DM)是由胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用障碍导致的以高血糖为特征的代谢性疾病[1]。1型糖尿病由多因素共同作用引发了胰岛β细胞为主体的自身免疫损害反应,完全依赖外源性胰岛素,而2型糖尿病的发病机制是胰岛素受体失调。全球接近200万糖尿病(DM)患者中2型糖尿病患者(Type2di

6、abetesmellitus,T2DM)的发病率高达90%~95%[2]。糖代谢异常引起肾小球硬化造成肾功能损伤和障碍导致的糖尿病肾病(diabeticnephropathy,DN)是糖尿病最常见的微血管并发症,也是导致终末期肾病(endstagerenaldisease,ESRD)和DM患者死亡的主要原因[3]。目前糖尿病对肾脏的影响已成为全球研究热点之一。在中东地区,传统观念认为饮用驼奶能够预防和控制糖尿病。调查研究发现在经常饮用驼奶的印度拉贾斯坦邦北部地区,糖尿病发病率为0[4]。对驼奶中有效成分研究并发现其含有大量的溶菌

7、酶、乳铁蛋白、乳酸过氧化酶、免疫球蛋白G和分泌型免疫球蛋白A[5]。Beg[6]等分析驼奶部分蛋白的氨基酸序列发现其富含的半胱氨酸与胰岛素家族肽类具有表型相似性。Breitling[7]研究表明驼奶中类胰岛素样蛋白对β细胞的免疫调控可能是控制糖尿病发生的关键。现代多项研究报道[8-11]指出驼奶可以降低1型糖尿病患者的胰岛素(INS)用量。此外,本研究团队已发现驼奶能降低T2DM大鼠血糖浓度,减轻肝脏组织结构病变,并通过上调Bcl-2表达和抑制Bax的活性,明显抑制T2DM大鼠肝脏细胞凋亡[12]。本试验以T2DM大鼠肾脏细胞凋

8、亡为切入点,探讨双峰驼奶对肾脏的保护作用。1材料与方法1.1材料1.1.1双峰驼奶的采集双峰驼奶采自甘肃省酒泉市瓜州县锁阳镇新沟村,参照文献报道的方法处理[13]。双峰驼奶收集于灭菌处理的不锈钢容器中,储存于无菌的玻璃瓶后尽快运回实验室(<8h),置于-80℃冰

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