医学硕士研究生开题报告范文_2

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1、神经元形成、干细胞增殖、星形胶质细胞和细胞凋亡的在各发育阶段人胚胎脊髓中的检测导师XX教授研究生XX一、课题名称:神经元形成、干细胞增殖、星形胶质细胞和细胞凋亡的在各发育阶段人胚胎脊髓中的检测二、研究目的及意义三、立论依据和国内外研究现状四、实验方法1、动物和试剂2、仪器3、实验详细步骤五、预期目标六、已具备条件和个人条件七、前期工作基础（可行性）八、研究工作的主要阶段、进度和完成时间九、经费预算十、实验风险及前景分析一课题名称：NeuN，nestin，GFAP在人胚胎脊髓发育过程中的表达及凋亡细胞的

2、检测二研究目的及意义：目的：1.检测nestin，GFAP，NeuN在人胚胎脊髓各个发育阶段中的表达及变化；2.不同发育阶段的人胚胎脊髓中凋亡细胞的检测。意义：检测在人胚胎脊髓中神经干细胞、神经元、星形胶质细胞、凋亡细胞的时空变化规律，探讨其在人胚胎脊髓发育过程中的机制，脊髓发育缺陷的机制，以期为人类胚胎脊髓的发育规律，脊髓损伤后的治疗、修复提供理论依据。三立论依据和国内外研究现状1.脊髓损伤严重威胁人们的健康和生活质量，被视为临床治疗的难题。脊髓损伤后的修复一直是神经科学研究领域的一大难题。近年来神

3、经干细胞的发现及其相关研究为脊髓损伤的治疗提供了一种新的策略。神经干细胞的生物学特性为[1](GageFH,2000)：①能分化为神经组织或来源于神经系统；②具有自我更新能力；③通过非对称分裂产生新的细胞。神经干细胞存在于中枢神经系统的各个发育阶段。在胚胎神经发育过程中，神经干细胞的繁殖发生于神经管相连的中央管表面[2](马以骝,2001)。神经干细胞由胚胎早期的室管膜上皮产生且具有多向分化潜能，可通过对称或不对称分裂出新的干细胞或分化成逐渐变小的子细胞，最终产生神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞

4、[3](CataudellaT,2004)。神经巢蛋白（neuroepithelialstemcellprotein,Nestin）是Hockfield和Mckay于1985年首先发现的第Ⅵ类中间丝蛋白质，主要在胚胎期神经前体细胞和神经干细胞呈一过性表达。主要定位于细胞质，是未分化状态多能神经干细胞的标志性抗原。Nestin表达起始于神经板的形成，随着神经干细胞的不断分化，最终成为成熟的神经元和胶质细胞时，巢蛋白分别被神经丝（neurofilament,NF）蛋白和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）等所取代

5、[4](HockfieldS,1985)。许多动物实验表明在中枢神经系统的不同发育阶段，神经干细胞与神经元和神经胶质细胞是同时并存的，其比例随着胚龄的增长而发生变[5](ConradAM,2002)。2.胶质细胞是神经系统中除神经元外的另一类细胞成分。数量上胶质细胞远多于神经元，有报道CNS内胶质细胞与神经元的数目之比为10：1～50：1。星形胶质细胞约占正常成人中枢神经系统细胞总数的40％。星形胶质细胞在中枢的作用不仅仅是保护、营养和支持，还参与血－脑屏障的构成、水的转运、递质的代谢和释放、离子平衡

6、的维持等[6~8](VanDcGraaff,1998;SulyoklE,2004;朱长庚.神经解剖学)。胶质纤维酸性蛋白（glialfibrillaryacidicprotein，GFAP）是构成神经胶质细胞的主要细胞骨架蛋白，其表达的高低可以反映胶质细胞的功能状态[9](BiginiP,2001)。活化的星形胶质细胞内GFAP的增高，可能起保护神经元的作用，星形胶质细胞在损伤区分泌多种神经营养因子，以促进中枢神经和周围神经轴索的生长和存活[10](JCdelaTorre,2002)。3.在神经系统发

7、育中一个引人注目的现象就是伴随着细胞生长分化的同时也发生大量的细胞死亡。发育中出现的这种由细胞内特定基因程序性表达介导的细胞死亡称为程序性细胞死亡（programmedcelldeath，PCD）。有人估计胚胎时期产生的神经元在向成体发育过程中通过PCD几乎丢失了50％～80％。很多研究表明PCD存在于神经系统发育的多个环节[11](NaruseI,1995)，从未分化的神经上皮到迁移后的有丝分裂后细胞，从神经管的形成[12](李泽桂,1999)到神经元与靶区的匹配都有PCD发生，凡不能与靶区正确匹配

8、和参与正常神经网络形成的神经元均通过PCD加以清除[13](HommaS,1994)。四实验方法4.1动物和试剂收集从3周到8个月共15个时段的人胚胎脊髓标本81例；所需试剂：封闭用正常羊血清（原液）厂家：北京中杉金桥生物技术有限公司批号：ZLI-9020配制方法：封闭用正常血清原液可用PBS或TBS稀释成5-10%（即1：10-1：20倍稀释）后使用。3％H2O2厂家：天津市化学试剂三厂批号：050905配制方法：30%H2O250ml+蒸馏水450m