医学硕士研究生开题报告范文_1

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1、BDNF、NT-3在针刺促进脊髓可塑性中的作用导师：xxx研究生：xxxxxxxxxx一引言1脊髓损伤：脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)是神经系统疾患的一大难题，它具有高发生率、高致残率、高耗费、低死亡率等特点。研究脊髓损伤的修复及其机理，寻求治疗脊髓损伤的有效手段，从结构和功能上促进损伤神经组织的修复及功能重建，具有十分重要的现实意义。2脊髓具有可塑性：1958年，Liu和Chambers首次证实脊髓具有可塑性，突破了过去认为centralnervoussystem(CNS)是一成不变的观念，使人们对CNS有了新的认识(Liu.1958)。随后，国外广大学者

2、应用溃变染色法、超微结构定量法、辣根过氧化物酶（HRP)逆行追踪法及组织化学法(Goldberger.1974-Wu.1986)等手段进一步证实脊髓具有可塑性现象。国内吴建中、赵忠球等为可塑性研究提供了不少形态学证据(吴建中.赵忠球2002)。3针刺促进脊髓可塑性在脊髓损伤方面，很多相关文献报道电针刺对脊髓损伤后运动以及感觉功能的恢复有良好的改善作用(陈之罡.1955-徐水凌.2004)，进而对脊髓可塑性有促进作用。4针刺与神经营养因子电针刺可通过激活一些神经营养因子如NGF、BDNF、NT-3、GDNF、PDGF或细胞即刻早期基因如c-fos/c-jun等的表达来参与脊髓可塑性和

3、电针刺促进脊髓可塑性的过程(吴良芳.1994-Wang.2007)因此，为了提供哺乳动物脊髓可塑性及电针刺促进脊髓可塑性中更直观的形态学证据本研究采用跨神经元形态学示踪和酶免疫组织化学方法，在光镜下观察和探讨备用背根中枢终末在猫脊髓内是否存在可塑性出芽现象，以及电针刺和使用BDNF、NT-3抗体封闭后这种出芽的差异变化.了解猫备用背根造模后脊髓可塑性中备用背根节神经元的出芽能力及其与电针刺和神经营养因子的关系，进而加深对脊髓可塑性和电针刺促进脊髓可塑性中神经营养因子作用的形态学方面的认识，以进一步丰富神经生物学神经系统损伤修复的基础理论，为临床脊髓损伤修复的治疗提供一些形态学方面的

4、支持和理论依据。二实验目的观察正常猫备用背根节神经元的纤维联系观察备用背根猫备用背根节神经元的纤维联系观察针刺后备用背根节神经元的纤维联系及出芽观察备用背根猫体内BDNF抗体封闭后备用背根节神经元的纤维联系观察针刺在体内封闭BDNF抗体后备用背根节神经元的纤维联系及出芽观察备用背根猫体内NT-3抗体封闭后备用背根节神经元的纤维联系观察针刺在体内封闭NT-3抗体后备用背根节神经元的纤维联系及出芽三实验方法1.实验动物分组2.动物模型制备3.穴位选择和针刺方法4.实验所需仪器和试剂5.体内抗体封闭6.HRP示踪技术7.WGA-HRP-TMB-SNP呈色反应实验动物分组取健康成年猫12只

5、（体重3-3.5kg).随机分为4组，每组3只:正常对照组双侧部分去背根术后左侧针刺组双侧部分去背根术后左侧针刺加BDNF抗体封闭组双侧部分去背根术后左侧针刺加NT-3抗体封闭组2.动物模型制备实验动物用2%戊巴比妥钠（2ml/kg）腹腔注射麻醉后双侧备用根手术（即切除双侧L1-L5、L7-S2背根节，保留双侧L6为备用根）。对照组不做任何处理。3.穴位选择和针刺方法本研究仍沿用本室既往已选用的L6脊神经外周支配区内的两组穴位：足三里和悬钟，伏兔和三阴交。电针刺激于动物术后当日开始。以两根1寸毫针分别刺入一组中的两个穴位作为正负极电针，以频率98次/分针刺30分钟（15分钟时交换电

6、极），每天针刺一组穴位，两组穴位交替进行，直至动物取材为止。左侧针刺。图二足三里，腓骨小头前下方1.5cm处的肌沟中；悬钟，外踝尖上1.5cm、近腓骨前缘处；伏兔，髂前上棘与髌骨底外侧端连线的中下1/3交界处；三阴交，内踝尖上1.5cm胫骨内缘后方。4.实验所需仪器和试剂4.1仪器37℃恒温箱上海市跃进医疗器械一厂恒温水浴箱黄骅市渤海电器厂恒冷冰冻切片机GermanyLeicaCM900低温冰箱Sanyo（-20℃，4℃）1000、100、10μl可调微量加样枪上海医用激光仪器厂电热蒸馏水器北京市光明医疗器械厂微量进样器上海高鸽工贸有限公司850-C型电针仪广东省汕头市医用

7、设备厂4.2试剂BDNF抗体FlindersUniversityofSouthAustraliaNT-3抗体WGA-HRP（2%结合态）(Toyobo,Tokyo,Japan)TMB（四甲基联苯胺）T8768Sigma分装SNP（硝普钠）北京化工试剂厂产品戊二醛溶液（含量25%）汕头市达濠精细化学品公司免疫组化常规试剂：Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O、NaCl、多聚甲醛、HCl、NaOH、蔗糖theDepartmentofHumanPhysiol