病毒性肝炎血清学检测的基础与实践

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1、南京大学医学院周乙华附属鼓楼医院感染科病毒性肝炎血清学检测的基础与实践为什么ELISA检测抗体容易假阳性检测抗体和抗原的基本原理－－ELISA病毒性肝炎血清学检测的基础和实践讲解内容甲型肝炎乙型肝炎丙型肝炎丁型肝炎戊型肝炎4.如何克服抗-HEV检测中的假阳性为什么ELISA检测抗体容易假阳性?抗体的粘附特性，特别是IgM抗体ELISA的高灵敏性抗体结合抗原的适应性：Fab－CDR抗-HIV初筛试验抗-HIV确诊试验CLVLVHCH1CH2CH3V区Fab段Fc段s-ss-ss-ss-sCDR1CDR3CDR2抗体结构简图IgM是五聚体，与抗原具有5或10价结合力。Fab：frag

2、mentantigen-bindingCDR：complementaritydeterminingregionFab段抗体结合抗原的适应性：Fab－CDR抗体产生过程简图间接ELISA检测抗体1.抗原包被2.封闭3.待测血清4.酶标二抗5.TMB显色6.2MH2SO47.OD450EEEEEE+SubstrateTMB抗-IgG抗-IgA抗-IgMIgGIgAIgM抗体的粘附特性00.501.001.502.00原倍10100100010000血清稀释倍数OD450间接ELISA，无抗原包被间接法ELISA检测抗体，灵敏，但容易出现假阳性捕捉法ELISA检测IgM抗体1.抗mu链

3、抗体包被2.封闭3.待测血清4.酶标抗原（特异性）5.TMB显色6.2MH2SO47.OD450CLVLVHCH1CH2CH3V区s-ss-ss-ss-s敏感性较间接法低，但特异性强ELISA检测抗原1.抗体包被2.封闭3.待测血清4.酶标抗体5.TMB显色6.2MH2SO47.OD450EEEEEE+SubstrateTMB包被抗体与酶标抗体识别的免疫表位必须不同病毒性肝炎甲型乙型丙型丁型戊型HepatitisAVirus,HAVHepatitisBVirus,HBVHepatitisCVirus,HCVHepatitisDVirus,HDVHepatitisEVirus,HE

4、V消化道血液消化道感染途径血液血液病原学病程分型急性急性,慢性急性,慢性急性,慢性急性GBV-C，所谓庚型肝炎病毒，不引起肝损，不是肝炎病毒EB病毒、巨细胞病毒等可引起肝损，但以脏器损伤为主，不称肝炎病毒病毒性肝炎的病原诊断根据临床表现无法确定病原诊断依赖实验室检查血清学方法：血清+免疫技术检测抗原或抗体分子生物学：酶免疫测定：enzymeimmunoassay,EIA酶联免疫吸附测定：enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA分子杂交：同位素或其他物质标记已知DNA或cDNA，即探针，与待测标本中的核酸互补，特异性结合。－－淘汰聚合酶链反应：po

5、lymerasechainreaction，PCR－－普遍使用甲型肝炎病毒HAV无包膜RNA病毒：抗原种类少正链RNA，7.4kbHAV抗原只有一种，即衣壳蛋白；难以测到，不开展特异性抗体：抗-HAVIgG,IgM，保护性抗体；常用HAVRNA：RT-PCR检测，但阳性率低，仅用于研究024681012抗甲肝抗体浓度感染后周数病毒血症大便排病毒转氨酶升高期症状期IgMIgGHAV感染后人体抗体应答抗-HAVIgM：感染后～3周即可阳性，1-3月后转阴，近期或急性感染。抗-HAVIgG：IgM产生后数天即可阳性，存在数十年，单纯阳性很可能是既往感染，故单独检测抗-HAVIgG通常不

6、用于诊断。甲型肝炎诊断流程同时检测抗HAVIgM和IgG时：4种情况仅检测抗-HAVIgM时甲型肝炎抗-HAVIgM阳性抗-HAVIgG阳性甲型肝炎1.2.既往感染，对甲肝有免疫力排除甲肝，而且为易感者抗-HAVIgM阴性抗-HAVIgG阳性抗-HAVIgM阴性抗-HAVIgG阴性3.阳性阴性排除甲型肝炎诊断流程同时检测抗HAVIgM和IgG时：4种情况甲型肝炎早期或IgM假阳性1-2周后复查甲型肝炎甲型肝炎IgM假阳性排除甲型肝炎抗-HAVIgM阳性抗-HAVIgG阴性IgM阳性IgG阳性IgM阴性IgG阳性IgM阳性IgG阴性4.乙型肝炎病毒HBV颗粒完整HBV：Danepa

7、rticle；球形，42nm，双层壳膜结构小球形颗粒：22nm，乙肝表面抗原（hepatitisBsurfaceantigen,HBsAg）丝状(管状)颗粒：直径22nm，长短不等，HBsAg18.7万倍20万倍25万倍HBV双层壳膜结构，外层是HBsAg，内层是HBcAgHBV基因与基因产物pre-S1pre-S2ORFSORFPORFXORFCpre-C+-5’5’HBsAgPolymerase:DNApolymeraseRNaseHReversetranscriptaseo