小鼠胰高血糖素样肽1glp-1酶联免疫分析elisa

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时间:2018-09-22

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1、小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰高血糖素样肽1(GLP-1)的含量。实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)水平。用纯化的小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰高血糖素样肽1(GLP-1),再与HRP标记的胰高血糖素样肽1(GLP-1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转

2、化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰高血糖素样肽1(GLP-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)浓度。试剂盒组成:试剂盒组成说明书48孔配置1份96孔配置1份保存封板膜2片(48)1个2片(96)1个密封袋酶标包被板标准品:4.5pmol/L标准品稀释液酶标试剂1×481×962-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶(20m

3、l×20倍)×1瓶0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶(20ml×30倍)×1瓶样品稀释液显色剂A液显色剂B液终止液浓缩洗涤液样本处理及要求:1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-30

4、00转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分1 钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入

5、一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100µl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50µl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100µl分别加到第三孔和第

6、四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50µl弃掉,再各取50µl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50µl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl,混匀后从第七、第八孔中分别取50µl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50µl,混匀后从第九第十孔中各取50µl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50µl,浓度分别为3pmol/L,2pmol/L,1pmol/L,0.5pmol/L,0.25pmol/L)。加样:分

7、别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。2.3.4.5.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.7.8.9.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。温育:操作同3。洗涤:操作同5。显色:每孔

8、先加入显色

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