小鼠胰高血糖素样肽1glp-1酶联免疫分析elisa

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1、小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中胰高血糖素样肽1(GLP-1)的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)水平。用纯化的小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰高血糖素样肽1(GLP-1)，再与HRP标记的胰高血糖素样肽1(GLP-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转

2、化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰高血糖素样肽1(GLP-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)浓度。试剂盒组成：试剂盒组成说明书48孔配置1份96孔配置1份保存封板膜2片（48）1个2片（96）1个密封袋酶标包被板标准品：4.5pmol/L标准品稀释液酶标试剂1×481×962-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存2-8℃保存0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶3ml×1瓶（20m

3、l×20倍）×1瓶0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1瓶（20ml×30倍）×1瓶样品稀释液显色剂A液显色剂B液终止液浓缩洗涤液样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-30

4、00转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分1 钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入

5、一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100µl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50µl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100µl分别加到第三孔和第

6、四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50µl弃掉，再各取50µl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50µl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl，混匀后从第七、第八孔中分别取50µl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50µl，混匀后从第九第十孔中各取50µl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50µl，浓度分别为3pmol/L，2pmol/L，1pmol/L，0.5pmol/L，0.25pmol/L）。加样：分

7、别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。2.3.4.5.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.7.8.9.加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔

8、先加入显色