小量全血基因组dna快速提取(离心柱型)操作方法及步骤说明书

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1、杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.com◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外◆TRIpureReagent抽提指南◆目录号RP02◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外小量全血基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN01目录编号包装单位DN010150次DN0102100次DN0103200次DN011150次(带蛋白酶K粉)DN0112100次(带蛋

2、白酶K粉)DN0113200次(带蛋白酶K粉)v适用范围：适用于快速提取全血基因组DNAv试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次平衡液室温5ml10ml20ml缓冲液BB室温10ml20ml40ml结合液CB室温15ml30ml60ml抑制物去除液IR室温25ml50ml100ml漂洗液WB室温15ml25ml50ml第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB室温15ml15ml15mlx2蛋白酶K粉（可选）20mg/ml-20℃20mg20mg×220mg×4吸附柱AC室温50个100个

3、200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。-7-杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.com储存事项:1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。2.为避免降低活性，方便常温运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解。因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分装冻存，－20℃保存。3.避免试剂长时间暴露于空

4、气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。v产品介绍：独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。v产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。2.快速，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。3.多次柱漂洗确保高纯度，典型的产量200µl全血可提取出3-12µg

5、，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达30kb-50kb，可直接用于PCR、Southern-blot和各种酶切反应。4.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全，客户可根据需要选择购买。5.典型的产量200µl全血可提取出3-12µg基因组DNA。-7-杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.comv注意事项：1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf5415C或者类似离心机。2.不同样品尤其

6、疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大。3.需要自备异丙醇。4.开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。5.为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。6.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mMTris-HCl，1mMEDTA，pH8.0），

7、但是EDTA可能下游酶切反应，使用时可以适当稀释。v关于平衡液的使用1.介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失。2.使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μl的平衡液至柱子中。1300

8、0rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。-7-杭州昊鑫生物科技股份有限公司htpp://www.hzhxbio.comv操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!1.取200ul新