小量血液基因组dna直接提取试剂盒离心柱型

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1、小量血液基因组DNA直接提取试剂盒（离心柱型）GK4001-5050PrepsGK4001-100100PrepsGK4001-200200Preps一.试剂盒组成ComponentsGK4001-5050PrepsGK104001-100100PrepsGK4001-200200PrepsGenCleanColumn2.0-mlCollectionTubeProteinaseK(a)BoiledRNaseALysisSolutionAW1Solution(b)AW2Solution(c)AEBuffer(d)TE-50(f)Protocol50501.2ml250μl15ml15.

2、5ml12ml10ml15ml11001002X1.2ml500μl30ml31ml12ml20ml15ml12002004X1.2ml2X500μl60ml62ml24ml40ml25m1(a)收到ProteinaseK，分装-20℃保存。(b)首次使用前，必须在AW1溶液瓶中按表示量加入无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持中的AW1乙醇含量。如果您发现AW1由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入0.6倍体积的无水乙醇。(c)首次使用前，必须在AW2瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持AW2中的乙醇含量。如果您

3、发现AW2由于运输或保管不当造成容量严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。(d)AEBuffer为10mMTris-HCl,0.5mMEDTApH8.5。TE(pH8.0)或者水（pH>7.0）均可以使用，但是DNA的洗脱效率通常要低20%左右。(f)本试剂盒中的TE-50是10mMTris-HCl，50mMEDTApH8.0。二.基本原理:临床常常需要从血液中抽提基因组DNA，用于病症的辅助性分析和诊断等。本试剂盒的设计是直接从全血中提取血液的DNA,血液用裂解液处理后。GenClean柱膜能选择性吸附样品中基因组DNA，而不吸附蛋白质和其它非核酸类物质。经简单的洗涤步

4、骤，即可得到样品基因组DNA。三.主要用途:本试剂盒主要用于从人或哺乳动物血液中提取基因组DNA，抽提出的DNA直接可用于PCR、Southernblot等分子生物学相关实验。本试剂盒是针对200μl或以下体积的样品可以直接提取，大于200μl的样品可以分管提取。或如裂解液不够，可单独购买本试剂盒中的裂解液，每个离心柱最多可用于提取1ml血液基因组的DNA,分管裂解后，在一个离心柱上，分多次离心实现全部基因组DNA的吸附。保存于4℃的血液，3天后核内DNA开始降解，如不能及时提取，请于-80℃保存。如果想一次处理更多血液样品，请选用本公司的其它血液提取试剂盒。本试剂盒也可用于细胞和革

5、兰氏阴性菌基因组DNA的提取，提取革兰氏阳性菌基因组DNA需要自备溶菌酶。四.主要特点：1.本试剂盒针对性强，操作快速简单。2.GenClean柱回收血液基因组DNA效率高、纯度高。五.血样的收集：2血液用ACD(0.48%CitricAcid，1.32%SodiumCitrate，1.47%Glucose)或0.5MEDTA（pH8.0）抗凝。每6ml血液加1ml抗凝剂。建议最好不要采用肝素作抗凝剂，因为肝素是一些酶的活性抑制剂，因此在使用经肝素处理的血样直接进行PCR扩增时，PCR反应无法进行。而肝素酶I具有降解肝素的作用，如果在PCR反应体系中加入肝素酶I，或许可以促进PCR反

6、应的顺利进行。一般肝素酶的用量为在50μl的PCR的反应体系中加1μl(0.5U/μl)的肝素酶。一.提取基因组DNA操作步骤:1.取样品1a,新鲜血液，4℃保存血液，或冷冻血液200μl（4℃保存和冷冻血液需要先平衡到室温），直接进入下一步。1b,少于200μl血液，加入TE-50调节到200μl,进入下一步。1c,对于细胞（1×106～5×107）和革兰氏阴性细菌（最多可达5×108细菌，约0.5ml过夜培养菌液）的基因组DNA提取，离心收集细胞和菌体，吸净液体，悬浮于200μlTE-50。如冻存样品，余有液体，加入TE-50,控制总体积在200μl，进入下一步。1d,对于禽类血

7、液基因组DNA的提取，因红细胞有核，数量是白细胞1000倍，取1微升样品即可，加入TE-50到200μl,进入下一步。1f,革兰氏阳性菌基因组DNA提取，先收集菌体，完全去除上清，悬浮于190μlTE悬浮，加入10μl溶菌酶（控制终浓度为3mg/ml,溶于TE)室温5-10min,进入下一步。2，加入4μlBoiledRNaseA和20μlProteinaseK，混匀，加入200μlLysisSolution混匀，70℃保温10min。3，样品冷却到室温，