徐李圣开题报告定稿

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1、武汉生物工程学院毕业论文(设计)开题报告题目名称野生食用菌凝集素的筛选及活性检测题目类别____毕业论文______________系别____生物技术______________专业班级___08级生物技术系本科一班___学生姓名_________徐李圣_______________指导教师________邓政东_______________辅导教师________邓政东______________开题报告日期_____2011年6月25日_______7研究现状：蕈菌（mushroom）又称伞菌，作为生物名称通常译作蘑菇

2、，是指那些能形成大型肉质子实体的真菌，包括大多数担子菌类和极少数的子囊菌类，其富含蛋白质和氨基酸，具有降低胆固醇、增强免疫功能、抑制肿瘤、抗衰老等医疗保健作用[1]。凝集素（Lectin）是自然界广泛存在的一大类能凝集细胞、多糖或糖复合物的非源于免疫反应的糖蛋白，它能够特异性识别并可逆结合复杂糖复合物中的糖链，而不改变所结合糖基的共价结构。凝集素具有众多的生物活性，如凝集细胞的作用，免疫反应，细胞毒作用，作用于变异细胞以及发育细胞等，它已成为生物科学和临床科学非常有用的研究工具，并应用于临床诊断及治疗等。凝集素从发现至今已有

3、100多年的历史，自从1888年俄国学者首次在蓖麻籽中发现凝集素后，凝集素的研究一直继续。1919年Sumner从豌豆中分离出结晶蛋白，命名为ConA，并用此方法第一次获得了纯的凝集素。1936年Sumner和However报道了ConA可以凝集血细胞和酵母细胞，也可以在溶液中沉淀糖原。蕈菌凝集素早在上世纪60年代至70年代，已对超过600种高等真菌的提取物进行了测定，发现约30%具有凝集红细胞的活性。1994年Pemberton测定了403种采集于英国的蕈菌，发现约50%的蕈菌子实体提取物对人的红血球有凝集作用。越来越多的

4、研究表明，凝集素是药用真菌中重要的药理成分[2]。食用菌凝集素的来源极其广泛，到目前为止，已经发现存在凝集素的食用菌包括双孢菇，金针菇，灵芝，香菇，牛肝菌等等，其中多数存在于菌类子实体中，而有的则在发酵菌丝体，子实体中都有分布。不同菌种来源的凝集素其结构组成，分子量，对糖血细胞的专一性，等电点等物化性质都会有所差异。目前，蕈菌凝集素研究的较少，全世界已经纯化的凝集素约有100多种，研究发现，大多数大型真菌凝集素具有很强的抗肿瘤活性。如双孢蘑菇凝集素具有抑制结肠癌细胞株HT29、Coca22和乳腺癌细胞株MCF27的活性，金针

5、菇、灵芝、口蘑凝集素具有抗肿瘤和免疫调节生理活性。为此，扩大筛选食用菌凝集素，研究其性质，可以更好地为食用菌产品的开发应用提供科学依据。研究目的和意义：凝集素广泛存在于植物、动物、真菌、细菌甚至病毒中。凝集素具有多种生物活性，可凝集各种细胞，活化淋巴细胞及对复合糖质具有沉降作用等，因而被作为生化及临床试剂广泛应用于研究领域。另一方面，部分凝集素具有免疫调节或抑制肿癌细胞生长的活性，从而增加了研究凝集素的意义。食用菌含有丰富的蛋白质、氨基酸、矿物质和维生素，不仅是美味佳肴，还具有许多独特的医疗作用，具有降低胆固醇、增强免疫功能

6、、抑制肿瘤、抗衰老等医疗保健作用。从多种蕈菌的菌丝体或子实体中分离到的三萜类和多糖类物质具有调节寄主的免疫活性和抗肿瘤的作用。凝集素是另一类生理活性物质，部分凝集素能够选择性地抑制肿瘤细胞的生长并具有调节寄主免疫活性的作用。蕈菌凝集素的深入研究将进一步揭示蕈菌的药物学作用机制并为蕈菌产品的更广泛应用提供科学的依据。中国是蕈菌栽培最早的国家之一，也是生产大国，但多数蕈菌只是用于食用。蕈菌凝集素提取及红细胞凝集性能研究，有利于食用菌新品种的开发以及蕈菌凝集素在医学方面的研究。蕈菌凝集素主要存在于子实体中，且目前研究较少，故本研究

7、验证几种常见蕈菌凝集素的性质，重点探讨蕈菌凝集素的分子特性，旨在为蕈菌食用安全及加工、蕈菌其它用途方面提供科学依据。7研究内容（内容、结构框架以及重点、难点）：一、研究内容（一）蕈菌品种的选择（野生、栽培食用菌）。（二）蕈菌凝集素的粗提（20%--70%饱和度硫酸铵分级提取）。（三）凝集素凝血效果初测：血凝法。（四）选择凝血效果最好的利用DEAE2SepharoseFF层析柱(116cm×20cm)，用含0.15mol/LNaCl的PBS进行线性离子梯度洗脱，分部收集洗脱峰。（五）按CBB-G250法，以牛血清白蛋白为标准，

8、测定蕈菌凝集素的蛋白浓度。（六）聚丙烯酰胺凝胶电泳，测定凝集素相对分子质量。（七）检测蕈菌凝集素凝集活性的种属特异性。二、研究重点、难点（一）研究重点1、蕈菌凝集素的提取、纯化、凝集活性的检测；2、测定蕈菌凝集素的理化特性（蛋白质的相对分子质量、蛋白浓度、糖抑制性等）。（二）研究难点1、蕈