血液分析仪检验课件

《血液分析仪检验课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第三章血液分析仪检验自动血液分析仪（AHA）[血细胞计数仪（bloodcellcounter）],是临床检验最常用的筛检仪器之一。传统的显微镜血细胞计数或分类方法:速度慢、误差大、影响因素多，且难以满足临床大量标本检测需求。AHA可进行：①全血细胞计数及其相关参数的计算。②白细胞分类。③血细胞计数和分类的扩展功能，包括：有核红细胞计数、网织红细胞计数及其相关参数检测；幼稚粒细胞、未成熟粒细胞、造血干细胞计数；未成熟血小板比率；淋巴细胞亚型计数；细胞免疫表型检测等。第一节血液分析仪的检测原理现代血液分析仪综合应用了电学和光（化）学两大原理，用以测定血液有形成分（细胞）和

2、细胞内容物（血红蛋白）。电学检测原理包括电阻抗法和射频电导法；光（化）学检测原理包括激光散射法和分光光度法。激光散射法检测的对象有2类：染色的和非染色的细胞核、胞质颗粒等成分。一、电学检测原理1．电阻抗法即库尔特原理（图3-1）。电阻抗法是三分群血液分析仪的核心技术，可准确测出细胞（或类似颗粒）的大小和数量。电阻抗法还与其他检测原理组合应用于五分类血液分析仪中。图3-1电阻抗法细胞计数原理为提高计数准确性，部分仪器还采用3次计数、扫流和拟合曲线等技术进行血小板计数（图3-3）。电阻抗法还可用于白细胞计数及白细胞三分群分析。例如，电阻抗法红细胞计数和血小板计数是在相应通

3、道内进行计数，并根据二者体积不同，采用浮动界标法进行区分（图3-2）。图3-2电阻抗法正常红细胞直方图图3-3电阻抗法正常血小板计数和拟合曲线直方图2．射频电导法高频电流能通过细胞膜，用高频电磁探针渗入细胞膜脂质层，测定细胞的导电性，提供细胞内部化学成分、胞核和胞质（如比例）、颗粒成分（如大小和密度）等特征性信息。电导性特别有助于鉴别体积相同、但内部结构不同的细胞（或相似体积的颗粒。图3-4射频电流检测原理（二）光（化）学检测原理1．激光散射法将稀释、染色（化学染色或核酸荧光染色）、球形化的细胞悬液注入鞘液流中央，单个细胞沿着悬液和鞘液流两股液流整齐排列，以恒定流速定

4、向通过石英毛细管，即流体动力学聚焦技术（图3-5）。图3-5鞘流技术当细胞（或颗粒）通过激光束被照射时，因其本身的特性（如体积、染色程度、细胞内容物大小及含量、细胞核密度等），可阻挡或改变激光束的方向，产生与其特征相应的各种角度的散射光（表3-1）。放置在石英毛细管周围不同角度的信号检测器（光电倍增管）可接收特征各异的散射光（图3-6）。图3-6流式细胞术检测通道和光路系统用于血液分析仪检测的光散射分析理论是采用Mie同质性球体光散射理论。例如，红细胞/血小板经十二烷基硫酸钠和戊二醛固定呈球形后，采用流式细胞术激光散射法进行红细胞数量和相关参数的分析，其散点图见图3-

5、7和图3-8。图3-7线性化红细胞体积/血红蛋白浓度（V/HC）散点图图3-8光散射法血小板计数和红细胞计数散点图用于血液分析仪检测的染料分为荧光染料和非荧光染料。荧光染料有：碱性槐黄、噻唑橙、噁嗪、聚亚甲基蓝和碘化丙啶等，主要用于核酸染色，被激光照射后产生荧光和散射光，如采用荧光染料和激光散射法原理进行的网织红细胞计数（图3-9）。图3-9噻唑橙荧光染色网织红细胞检测散点图非荧光染料有：亚甲基蓝（用于核酸染色）氯唑黑E（用于单核细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞颗粒和白细胞的膜结构染色）过氧化物酶试剂。经过染色的细胞随鞘液流经激光检测区时，被染色部分可发生光吸收现象，使

6、光检测器接收到的散射光强度发生改变，从而区分细胞的种类。2．分光光度法主要用于血红蛋白测定。用于血红蛋白测定的溶血剂有2大类：①改良氰化高铁血红蛋白溶血剂：测定波长为540nm，稀释液含氰化物成分。②非氰化高铁血红蛋白溶血剂：即稀释液不含氰化物成分。如SLS-Hb法，测定波长为555nm。经HiCN法校准后，既可达到与HiCN法相当的精密度和准确性，又可避免HiCN法的试剂对检验人员的潜在危害和对环境的污染。（三）血液分析仪检测原理的综合应用1．VCS技术在白细胞检测通道，红细胞被溶解，白细胞接近自然状态。应用VCS技术检测白细胞大小、结构特点等（表3-2），并形成三

7、维散点图（图3-10，图3-11）。VCS技术检测病理性异常细胞的散点图位置见图3-12。图3-10体积（V）、电导（C）和光散射（S）法图3-11VCS细胞检测立体散点图图3-12VCS异常细胞检测平面散点图位置目前，该技术也可用于网织红细胞计数（图3-13）和有核红细胞的计数。如网织红细胞计数时，采用“透明剂”使红细胞内血红蛋白溢出形成“影细胞”，再用新亚甲蓝对网织红细胞RNA进行染色，采用VCS技术测定和分析网织红细胞。图3-13VCS原理新亚甲蓝染色网织红细胞散点图2．电阻抗、射频、流式细胞术和核酸荧光染色方法（1）4DIFF通道：利用半导体