第六章细菌对抗菌药物敏感性与耐药性

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1、微生物学检验第六章细菌对抗菌药物敏感性与耐药性本章内容第一节临床常用抗菌药物1第二节抗菌药物敏感试验2第三节分枝杆菌的药物敏感试验3第四节细菌的耐药性检查4学习目标学习目标：1．掌握抗菌药物敏感试验常用方法，纸片扩散法（K-B法）的操作方法、结果判断及实验质量影响因素2．熟悉耐药表型检测；β-内酰胺酶检测方法；超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）检测方法3．了解临床常用抗菌药物种类；药敏试验中药物选择原则本章重点：★纸片扩散法（K-B法）的操作方法及结果判断★药敏试验的临床意义第一节临床常用抗菌药物一、抗菌药物分类1.β-内酰胺类：抑制转糖基酶、转肽酶、D

2、-羧肽酶、内肽酶，从而细菌细胞壁合成。2.氨基糖苷类：抑制mRNA的转录和蛋白质的合成。3.喹诺酮类：作用于DNA旋转酶，干扰细菌DNA复制、修复和重组。4.大环内酯类：结合细菌核糖体50S大亚基，抑制细菌蛋白质合成和肽链延伸。5.糖肽类：阻断肽聚糖合成，阻阻碍细胞壁合成。第一节临床常用抗菌药物一、抗菌药物分类6.磺胺类：竞争性与二氢叶酸合成酶结合，使核酸合成抑制。7.四环素类：结合细菌30S核糖体亚基，抑制蛋白质合成。8.氯霉素类：作用细菌70S核糖体的50S亚基，抑制蛋白合成。9.林可酰胺类：结合细菌核糖体50S大亚基，抑制蛋白质合。10.其他抗菌

3、药物：硝基肤喃类、硝基咪唑类、链阳霉素类、噁唑烷酮类等。二、常规药敏试验药物选择原则我国主要遵循美国临床实验室标准化委员会（CLSI）制定的抗菌药物选择原则。第一节临床常用抗菌药物返回章内容U组：仅用于治疗泌尿道感染的药物。C组：在A、B组药物过敏或耐药时选用；B组：只在A组药物耐药、过敏、无效时选择性报告;A组：包括对特定菌群的常规试验并常规报告的药物；第二节抗菌药物敏感试验一、概述测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的方法称为抗菌药物敏感试验（AST）抗菌药物敏感试验方法纸片扩散法稀释法E-test法菌株被推荐剂量治疗感染部位可达到的抗

4、菌药物浓度抑制药物在生理浓集部位有临床效果，还代表敏感与耐药之间缓冲区菌株不能被常规剂量抗菌药物可到达的浓度所抑制敏感（S）耐药（R）中介（I）抗菌药物敏感试验结果第二节抗菌药物敏感试验二、纸片扩散法含有定量抗菌药物纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含药物吸收琼脂中水分溶解后向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，形成透明抑菌圈。抑菌圈大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系。第二节抗菌药物敏感试验二、纸片扩散法1.水解酪蛋白（MH）培养基，pH7.2～7

5、.4，做成琼脂厚度4mm，直径90mm的平板2.挑取孵育16～24小时已分纯菌落，置于生理盐水管中，振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准第二节抗菌药物敏感试验二、纸片扩散法3.用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液4.在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周5.平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或纸片分配器将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心距离应大于24mm，纸片距平板内缘大于15mm第二节抗菌药物敏感试验二、纸片扩散法6.平板置35±2℃孵育箱，16～18小时后判读结果。苛养菌应在含5%CO2环境中培

6、养20～24小时7.用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径。按照CLSI标准判读，报告敏感、中介、耐药第二节抗菌药物敏感试验纸片扩散法图解抑菌圈细菌生长药敏纸片细菌菌落抗生素浓度耐药敏感第二节抗菌药物敏感试验三、稀释法以一定浓度的抗菌药物与培养基进行一系列不同倍数稀释，经培养后观察被试菌株的最低抑菌浓度，根据CLSI提供的MIC解释标准判断细菌对抗菌药物的敏感程度。稀释法中使用肉汤培养基为肉汤稀释法，使用琼脂培养基为琼脂稀释法第二节抗菌药物敏感试验三、稀释法1.肉汤稀释法浓度48163264128256μg/ml混清抗菌药物素倍比稀释，接种菌105CFU/ml

7、，孵育温度35℃，16～20h，判读结果。第二节抗菌药物敏感试验三、稀释法2.琼脂稀释法浓度163264128256μg/ml制备含对倍抗生素浓度梯度的平板，制备菌悬液，点种菌，104/每点，孵育35℃，16～20h，判读结果第二节抗菌药物敏感试验四、E-test法E-test法（epsilometertest）结合了扩散法和稀释法的原理和特点，对抗菌药物直接测量MIC。E试条为宽5mm、长50mm的无孔试剂载体，一面固定有浓度呈连续指数增长的抗菌药物，另一面有所含药物浓度的刻度细菌生长区Etest塑料条椭圆形细菌生长抑制区2561288016判读抑菌

8、浓度（MICug/ml)第二节抗菌药物敏感试验四、E-test法1.菌液制备及接种均同纸片扩散