药物定量分析与分析方法验证课件

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1、第四章药物定量分析与分析方法的验证样品（包括生物样品）的前处理定量分析方法及验证内容药物分析课件-仁济药学专业第一节样品的前处理方法哪些药品需要前处理何为不经有机破坏处理何为有机破坏处理生物样品前处理一、需要前处理的样品含金属药物：富马酸亚铁、葡萄糖酸锑钠、枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌、酒石酸锑钾等。含卤素药物：泛影酸、三氯叔丁醇、碘番酸、磺溴酞钠等。生物样品：血样、尿液、唾液、头发等二、不经有机破坏处理的分析方法直接测定法适用于金属原子不直接与碳原子相连的或某些C—M键结合不牢固的有机金属药物经氧化还原后测定法（Zn）适合于卤素结合于芳环上的药物经水解后测定法适合于卤素与脂肪碳链相连的

2、药物适用于金属原子或卤素与碳原子结合牢固的有机金属药物。湿法破坏干法破坏三、经有机破坏处理的分析方法高温炽灼法氧瓶燃烧法1.湿法破坏（1）硝酸-高氯酸法（2）硝酸-硫酸法（3）硫酸-硫酸盐法（4）其它湿法注意：湿法破坏的仪器一般为凯氏烧瓶；试剂应不含被测离子或干扰测定的成分；由于矿酸量数倍于样品，须做空白实验校正；操作须在通风橱内进行。2.高温炽灼法适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。经高温灼烧灰化，使有机结构分解而待测元素转化为无机元素3.氧瓶燃烧法（Oxygenflaskcombustionmethod）将有机药物放入充满氧气的密闭燃烧瓶中进行燃烧

3、，并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或含量测定适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析仪器装置铂金丝硬质玻璃燃烧瓶样品无灰滤纸透明胶纸燃烧、催化称样燃烧分解操作（通O21-2min，燃烧）吸收液水-NaOH（含碘、溴、氯药物）例盐酸胺碘酮、碘苯酯、甲状腺粉水-H2O2（含硫药物）例磺溴酞钠水（含氟药物）硝酸溶液（含硒药物）四、生物样品分析前处理技术一般考虑根据生物样品种类血---除蛋白质尿---缀合物水解唾液---除去粘蛋白根据测定方法免疫分析——灵敏、专属——前处理要求简单光谱分析——灵敏、选择性差——前处理要求高

4、色谱分析——准确、精密，专属———除蛋白质根据药物理化性质酸碱度，溶解性，挥发性，紫外吸收性质等药物的浓度如ng，ug，mg级测定目的如药代动力学、代谢分型等去除蛋白质目的：使药物从结合状态下释放出来减少提取过程中的乳化消除干扰，保护色谱柱常用去蛋白方法：加入与水相混溶的有机溶剂——使蛋白质分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，与蛋白质结合的药物被释放出来（甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、丙醇、四氢呋喃）。一般离心速度在10000r/min（用具塞塑料离心管）前处理方法加入中性盐，如（NH4)2SO4，Na2SO4等，将与蛋白质水合的水置换出来，使蛋白质脱水而沉淀。加入强酸（10%三氯

5、乙酸、6%高氯酸等）在低于蛋白质等电点pH时，与蛋白质阳离子形成不溶性盐而沉淀。加入Zn2+、Cu2+在高于蛋白质等电点pH时，与蛋白质阴离子形成不溶性盐而沉淀。酶解法（蛋白水解酶—枯草菌溶素）使组织酶解，释放出药物，不会发生乳化，对与蛋白结合牢固的药物可显著改善回收率。缀合物水解缀合物主要是葡萄糖醛酸苷缀合物、硫酸酯缀合物、谷胱甘肽缀合物等。缀合物极性较大，难被有机溶剂提取，故需先进行水解。常用水解方法有：酸水解：如HCl，作用强、快、专属性差酶水解：常用葡萄糖醛酸苷酶或硫酸酯酶或该两种酶的混合酶。酶水解慢、专属、较温和溶剂解：较温和前处理方法有机破坏提取纯化液-液提取液-固提取被

6、测组分的浓集衍生化反应液固萃取液液萃取前处理方法第二节定量分析方法化学分析法光谱分析法色谱分析法重量分析法容量分析法紫外分析法UV荧光分析法FIA高效液相色谱HPLC气相色谱GC方法应用品种数新增仪器分析法HPLC339282TLC3212GC2319分光光度法183化学分析法滴定法133重量法51氮测定法51挥发油测定法30浸出物测定法132总计4563272005年版《中国药典》中成药含量测定方法概况容量分析法（滴定）概念：一定浓度的滴定液由滴定管加到待测药物溶液中，按化学计量反应完全。根据滴定液浓度、体积及化学计量计算被测药物含量。关键问题：等当点的确定。滴定点——指示剂显

7、示的滴定终点（指示剂的变色点）等当点——反应的化学计量点（消耗的滴定液的摩尔数＝被测物摩尔数）特点：操作简便、快速、实验条件易实现，但是灵敏度低，通常用于高含量和中含量药物滴定方式直接滴定法剩余滴定法置换滴定法含量的计算：定量关系：aAbB被测药物滴定液化学计量关系nA/a＝nB/bWA/aMA＝WB/bMB滴定度：1mL某物质的量浓度的滴定液相当于被测药物的重量，中国药典用mg表示。滴定度的计算：T→滴定度(mg/ml)c→滴定液浓度(mol/L)M→被