西洋参冠瘿组织培养及其人参皂苷re和人参皂苷rg1的产生

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1、!"卷#期生物工程学报’()*!"+(*#$%%#年&月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12,-.$%%#!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!西洋参冠瘿组织培养及其人参皂苷!"和人参皂苷!#的产生$!"$$!#!，$于荣敏宋永波张辉叶文才张荫麟姚新生（!暨南大学药学院，广州&!%3#$）（$沈阳药科大学制药工程学院，沈阳!!%%!3）（#中国医学科学院药用植物研究所，北京#!%%#!）摘要考察了培养基组成、培养时间、接种量、AB值、肌醇浓度等对冠瘿组织生

2、长及其人参皂苷含量的影响；用BCDE检测了冠瘿组织中人参皂苷F2和人参皂苷F;!的含量。高压纸层析电泳证实，根癌农杆菌18质粒上的1/G+H片段已整合进入植物细胞核基因组中。在考察的3种培养基中，I>8?2培养基最适合人参皂苷F;!的累积（%J%"&K），,L培养基最适合人参皂苷F2的累积（%J!"MK）。以,L为基本培养基培养#3N、#$N时人参皂苷F2和人参皂苷F;!累积含量最高（分别为%J!MOK和%J%3!K）；接种量为M;、$;（4IPQ)-RS），有利于人参皂苷F2和人参皂苷F;!的累积；培养基AB&J0时人参皂苷F2含量最高（%J!0MK），培养基A

3、B&J3时人参皂苷F;!累积量最高（%J%&MK）；肌醇浓度为%J%&;PD时，能促进人参皂苷F2合成（%J!0$K），浓度为%J#%;PD时，有利于人参皂苷F;!累积（%J%&&K）。关键词西洋参，冠瘿组织培养，人参皂苷F2，人参皂苷F;!，高压液相色谱中图分类号F"!&；L&3OJ&文献标识码H文章编号!%%%/#%3（!$%%#）%#/%#O$/%M西洋参（3+$+45)#$5)%-(,#)6）原产于美国东部和加拿大，冠瘿组织，并经筛选驯化形成的稳定、优良的无性细胞系。［!］是五加科（H9-)8-@2-2）人参属植物，属名贵药材，具益肺$%&方法阴、清虚火、

4、生津止渴之功效，用于肺虚久咳、失血、咽干口$%&%$西洋参冠瘿瘤的鉴定：称取新鲜的西洋参愈伤组织、渴、虚热烦倦等的治疗。西洋参的主要活性成分为人参皂苷冠瘿组织各!（;鲜重，4I），加入%J!7()PDBE)低温研磨，匀类（T8:R2:(R8N2R）化合物，多具有一定的生物活性，如人参皂浆后离心&78（:!$%%%9P78:，MU），用毛细管吸取上清液以及苷F2能减少乙酰胆碱引起的豚鼠离体子宫的收缩，对大鼠胭脂碱（+(A-)8:2）、章鱼碱（V@?(A8:2）和精氨酸（H9;8:8:2）标准有减慢心率和双相性血压（先升后降）作用，对猫的行为和脑品点样在I>-?7-:

5、#号滤纸上，滤纸点样端放在正极，M%%’电图显示中等程度的抑制作用；人参皂苷F;!除具有与人参电压电泳0%78:，顺方向取出滤纸，用热风吹干，放入%J%$K皂苷F2相似的生物活性外，尚可增强大鼠骨髓细胞G+H的菲醌（溶于无水乙醇）和!%K+-VB（溶于3%K乙醇）等体积生物合成，对蛋白质或脂质的生物合成亦有一定的增强作混合的染液中染色#%R，风干后在紫外灯（$&M:7）下观察、摄用。西洋参生长期较长，易受病虫害、气候、环境及栽培技术影。等多种不利因素的影响，故产品远不能满足市场要求，且价$%&%&西洋参冠瘿组织生长条件的考察：基本培养条件：将格昂贵。本研究利用转基

6、因技术将根癌农杆菌（71*(8+0/%*#)6由胭脂碱型根癌农杆菌E&0菌株诱导产生的冠瘿组织优良系/)6%-%0#%$&）中18质粒上的一段G+H（19-:RQ2992NG+H，1/G+H）分别接种在装有M%7D经!$!U、高压灭菌$%78:的固体培养插入植物细胞核基因组而得到其表现型———冠瘿组织。该基的!%%7D三角瓶中，置于$&W!U的恒温培养箱中暗培养，组织具有生长迅速、不需加入外源激素、次生代谢物含量高、琼脂为%J0K。固体培养冠瘿组织生长参数测定：参见文［$］遗传性状稳定等特点。本文在前期工作的基础上考察了献［$］。各种理化因子对西洋参冠瘿组织生长及

7、其次生代谢产物人$%&%’人参皂苷F2和人参皂苷F;!的BCDE检测：总皂苷参皂苷F2和人参皂苷F;累积的影响。［#XM］!的提取：取干燥培养物粉碎、称重，先用氯仿脱脂!J&>，再用甲醇于O%U水浴回流3>，回收甲醇得提取物!。该提取$材料与方法物用蒸馏水溶解，用水饱和的正丁醇萃取M次，回收正丁醇$%$材料得提取物$。提取物$用蒸馏水溶解，上G!%!大孔树脂柱，胭脂碱型根癌农杆菌E&0菌株感染诱导西洋参茎获得的流速!J&7DP78:，水洗脱，再用$%K乙醇洗脱，最后用O%K乙收稿日期：$%%$/!!/!#，修回日期：$%%#/%$/$0。万方数据"通讯作者。12)

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