海参肽对小鼠免疫调节及抗疲劳能力的影响

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1、山东医药2009年第49卷第25·基础研究·海参肽对小鼠免疫调节及抗疲劳能力的影响卢连华，周景洋，颜燕．胡祗光。郭玉文(1山东省疾病预防控制中心，济南250014；2烟台芝罘岛海洋生物科技有限公司)摘要：目的观察海参肽对小鼠免疫功能和抗疲劳能力的影响。方法经121给小鼠0．085、0．170、0．500g／kg海参肽，对免疫调节和抗疲劳等10项指标进行测定。结果海参肽对小鼠迟发型变态反应有促进作用，ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力明显增强，溶血空斑数、血清溶血素也显著高于对照组，巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬指数及

2、碳廓清指数明显高于对照组。海参肽能明显延长小鼠的负重游泳时问，显著降低运动后小鼠的血尿素氮含量和血乳酸水平，同时提高了肝糖原含量。结论海参肽能够增强小鼠单核巨噬细胞作用及体液免疫和细胞免疫功能，增强小鼠的抗疲劳能力。关键词：海参肽；免疫活性；抗疲劳中国分类号：R363文献标志码：B文章编号：1002-266X(2009)25-0035-03海参属无脊椎动物棘皮动物门，具有主补元气、1．2．2细胞免疫指标检测①迟发性变态反应滋益五脏六腑和祛虚损⋯等功能。海参肽系鲜活(DTH)：小鼠用2％绵羊红细胞(sRBC)腹

3、腔免疫，4海参经蛋白酶水解并精制后得到的以小分子肽为d后测量左后足跖的厚度，然后在测量部位皮下注主、多种功效成分共存的蛋白质水解产物，具有良好射2O％SRBC，24h后测量左后足跖的厚度，同一部的溶解性、稳定性和低黏度性。海参肽的多肽组成位测量3次取平均值。②脾淋巴细胞转化测定：将主要是相对分子质量2000以下的小肽，具有很强小鼠脾脏制成3×10个／ⅡIl细胞悬液，分两孔加入的抗氧化能力【2]。2008年我们通过检测海参肽对24孔培养板中，一孔加5OlConA液，另一孔作对小鼠10项免疫调节和抗疲劳指标的影响

4、，对其功效照，在5％CO2和37℃环境下培养72h。培养结束进行研究。前4h每孔吸去上清液0．7llll，加入0．7n1lRP-1材料与方法MI1640培养液，同时加入MTr50孔，继续培养1．1动物、试剂与仪器雄性SPF级ICR小白鼠4h，每孔加入Iml酸性异丙醇，使紫色结晶完全溶320只，体质量18—22g，由中国医学科学院实验动解后，在570am处测定光密度OD值。物研究所提供。海参肽由烟台芝罘岛海洋生物科技1．2．3体液免疫指标检测①血清溶血素(半数有限公司提供。主要仪器：CO：培养箱、Spectra

5、max溶血值HC5o)测定：用脱纤维SRBC免疫5d后，取PLUS型酶标仪(美国)、SBA-dO型乳酸分析仪(山血清用SA缓冲液稀释，取1ml依次加入10％SR—东省科学院)。主要试剂：YAC．1细胞、绵羊红细胞BC0．5IIll、补体1ml。另设不加血清的对照管(以(SRBC)、刀豆蛋白A(ConA)、M1rr、补体(豚鼠血SA液代替)。置37℃恒温水浴中保温30min后，清)、尿素氮测定试剂盒(二乙酰一肟法)、都氏试离心取上清1nll，加都氏试剂3ml，同时取10％SR．剂、蒽酮试剂、5％三氯乙酸(TCA

6、)、溶血剂、5．0BC0．25ml加都氏试剂至4nll充分混匀，放置lOmmol／L乳酸标准液、Giemsa染液等。min后，于540lira处测定光密度OD值，计算HC卯。1．2方法㈨②抗体生成细胞检测：SRBC免疫5d后，取脾脏组1．2．1分组与给药方法将小白鼠随机分成8组织制成细胞悬液。将表层培养基加热溶解后，与等各4O只，每组下设4组，分别为海参肽0．085、量pH7．2的Hanks液混合，分装小试管，再向管内0．170、0．500g／kg组和溶剂对照组(蒸馏水灌胃)。加入500．110％SRBC、2

7、0脾细胞悬液，涂于已刷各组经口灌胃1次／d，连续喂饲30d后分别进行以琼脂薄层的玻片上，在CO培养箱温育1．5h，然后下免疫指标和抗疲劳能力测定。用sA缓冲液稀释的补体加入到玻片架凹槽内，继35医药2009年第49卷第25期续温育1．5h后，计数溶血空斑数。1．3统计学方法采用SPSS11．5软件进行数据分1．2．4单核巨噬细胞功能指标检测①碳廓清指析，结果以±s表示。P≤0．05为有统计学差异。数：于尾静脉注射1：3稀释的印度墨汁，立即计时，2结果于注入墨汁后2、10min从眼内眦静脉采血20，2．1海参肽

8、对小鼠细胞免疫的影响见表1。加入2mlNa2CO溶液中，在600B1TI波长处测光密表1海参肽对小鼠淋巴细胞增殖及转化的影响(i4-$)度OD值。将小鼠处死，取肝脏和脾脏称质量，计算廓清指数。②巨噬细胞吞噬指数：小鼠腹腔注射20％鸡红细胞悬液1Tnl，30min后颈椎脱臼处死，注射0．9％氯化钠注射液2ml，转动鼠板1min，吸出腹腔洗液1rIll，37℃温育30min，晾干，丙酮甲醇溶注：与溶剂对