环状芽孢杆菌wxy100产β甘露聚糖酶的发酵条件及初步应用研究

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1、首都师范大学硕士学位论文环状芽孢杆菌WXY-100产β-甘露聚糖酶的发酵条件及初步应用研究姓名：杨新建申请学位级别：硕士专业：细胞生物学指导教师：王金洛;徐福州20060530首都师范大学硕士学位论文摘要B．甘露聚糖酶是由芽孢杆菌等分泌的一类能够水解甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘聚糖的生物活性酶。近年来，它在降解植物胶生产功能性甘露低聚糖以及作为饲料添加剂等方面倍受关注。本试验以胶豆角和高温为筛选条件，获得一株高产B一甘露聚糖酶的环状芽孢杆菌(命名为wxY．100)。通过正交设计方法筛选优化该菌培养基配方和产酶条件，培养基配方为：酵母抽提物20g几、魔芋粉209，L、删H

2、mS0429／L、Ⅺ{2P0419，L、Mgs04·7H201g，L；产酶条件为：菌种种龄8—12h、接种量6％、装液量25111l、pH7．5、培养温度40℃、培养时间25h。根据上述最佳条件，该菌体产生的B一甘露聚糖酶的比活性最高可达到1002．25咖l。发酵液离心去除菌体，上清液经过硫酸铵沉淀、透析、浓缩，得到相对较纯的B一甘露聚糖酶，然后对其性质进行了初步研究，结果为：在皿“～8和印℃以下稳定，作用最适条件是p出．0和60℃，Cu“和co“对酶有比较显著的激活作用，Ba“只有微弱的激活作用，H92+对酶有强烈的抑制作用，m”、Mn“、Fc“、zn2+、Ag+、F

3、e3+对酶有一定的抑制作用，EDTA、Ca2+、Mg“、F、Na+对酶活性影响不大。在环状芽孢杆菌WXY一100产B．甘露聚糖酶的各项指标筛选优化的基础上在发酵罐中进行放大研究，通过在50L发酵罐中6一甘露聚糖酶发酵过程的规律以及操作条件(纯氧的摄入、pH的变化、补料等)对发酵过程影响的筛选，获得了环状芽孢杆菌wxY一100产B一甘露聚糖酶的发酵罐放大工艺，进而通过发酵罐的放大作用研究环状芽孢杆菌w)“．100产B．甘露聚糖酶的特点，从而提供可宣接放大的参数，为进一步工业生产提供方法和操作条件。最后本试验对环状芽孢杆菌wxY-100发酵产物(主要成分为B·甘露聚糖酶)作

4、为饲料添加剂的应用效果进行了初步研究。通过发酵产物对肉鸡体重均匀度的影响及其抗感染作用研究结果发现，发酵产物的添加可以有效的改善动物的体重均匀度，改善程度平均在25％左右；同时可降低动物感染后的死亡率，提高增重，降低料肉比。该研究结果提示环状芽孢杆菌w)“．100发酵产物作为饲料添加剂具有较好的应用前景。关键词：B．甘露聚糖酶；环状芽孢杆菌；产酶条件：性质：发酵；应用首都师范大学硕士学位论文AbstractB—mannanase，akindofbjologicalenz，

5、IIlesecretedbymanymjcmo唱anismssuchas且∞珊郴c抛埘n馘call

6、hydr01yzegalactomallllall，galact091ucom锄anofglucomann柚into01igosacch撕de．It’swidelyuSedinfeedadditivefordegradingvege诅blegIlmintoma帆a—01i90sacch撕detodealwithanti—nutritlonagents．UndertheselectivepressureofIocustbeangumandhightemperamre，asnainof且卵，胁凸c打℃耐讲坫，ternledWXY*100，wasisolated卸dident

7、ifiedwithproducingneu删B-m锄nallase．ThccuItureingredje吣andcondnionswereoptimizedwith也e础lononnaltableb(34)method．studiesshowedthattllecu蛔辑componentsforoptimi删onofB-mafln柚aseproductionwercyeastexnact20g，L，Konjal(powder20叽，讲H4)2s042g儿，KH2P041g，La11dMgS04。7H20lg，L；aIldtheoptimalcuItureconditio

8、nswereseedincubationtime8—12h，inoculalionratio6％，culturevolme25mL，pH7．5，凫rrnen协tiontemper咖re40℃afldferrnentationtime2sh．Thehi曲esten巧meactivbwas1002．25u，mlwhenprovidedwjthmeabovecu胁reingrcdientsandcondi廿ons．nlen，B-m踟anasewaspurifiedbyc咖ri如gation，deposition，dialysisa11dconc