盐酸法舒地尔对大鼠慢性低灌性脑缺血所致学习记忆障碍的改善作用

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1、盐酸法舒地尔对大鼠慢性低灌性脑缺血所致学习记忆障碍的改善作用黄琳1,2郭莲军1李玉珍2（1北京大学人民医院，北京100044；2华中科技大学同济医学院基础医学院药理学系，武汉430030）摘要目的探讨Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔对大鼠慢性低灌性脑缺血损伤的影响。方法永久性结扎大鼠双侧颈总动脉制作大鼠慢性低灌性脑缺血损伤模型。运用Morris水迷宫检测各组大鼠空间学习记忆能力；运用在体电生理技术记录各组大鼠海马CA3区群峰电位，给予高频刺激后观察诱发长时程增强(Long-TimePotentiation,LTP)的情况；免疫组化、Westernblot技术分析nNOS的表达。结果Mor

2、ris水迷宫检测发现模型组大鼠学习记忆能力受损，与假手术组比较逃避潜伏期延长、空间辨别能力下降；在体电生理记录中模型组大鼠LTP诱发困难；模型组大鼠皮层和海马部位nNOS表达均减少。给予盐酸法舒地尔能改善脑缺血所致的大鼠学习记忆障碍，提高LTP诱导率和幅值，增加nNOS的表达。结论盐酸法舒地尔可以改善慢性低灌性脑缺血所致的学习记忆能力损害、突触传递功能障碍和神经元损伤，其可能的作用机制为增加nNOS的表达。关键词盐酸法舒地尔；Rho激酶；慢性脑缺血；Morris水迷宫；长时程增强（LTP）；nNOS小G蛋白Rho参与调节多种细胞功能，如平滑肌细胞的收缩、细胞骨架的重塑、细胞粘附和移动

3、、胞质分裂、基因表达等[1]。Rho激酶为Rho特征性的效应器。目前，Rho/Rho激酶途径在细胞水平的功能和信号转导已被广泛研究，然而，有关该信号通路在体水平的报道则很匮乏。盐酸法舒地尔（hydroxyfasudil,HF），一种Rho激酶特异性抑制剂，是研究Rho/Rho激酶信号通路非常有效的工具药[2]。该信号通路可以调节平滑肌收缩的最终阶段肌球蛋白轻链的磷酸化水平，与血管痉挛[3]、动脉粥样硬化[4]和高血压[5]等疾病的发生均密切相关。我们前期的实验也表明HF可缓解及预防狗迟发性脑血管痉挛，改善狗迟发性脑血管痉挛模型的大脑皮质血流，选择性地增加脑血流量[6]。然而，有关该通

4、路在脑缺血神经元损伤方面的报道很少。Rho/Rho激酶信号通路与神经细胞的生长和功能活动是密切相关的。在两种短暂性脑缺血动物模型小鼠大脑中动脉栓塞模型[7]和大鼠脑微血栓模型[8]中，法舒地尔或盐酸法舒地尔可显著改善神经功能并减少脑梗死体积。Lehmann等报道C3毒素抑制Rho从而促进神经轴突生长[9]。p160ROCK抑制剂Y-27632促进皮质脊髓束损伤大鼠的神经轴突生长，加快其运动功能的恢复[10]。因此，Rho/Rho激酶信号通路在神经损伤的病理生理过程中也占有重要地位[11]。目前，有关Rho/Rho激酶在慢性脑缺血所致神经损伤的研究尚很少见。有研究指出：双侧颈总动脉永久

5、性结扎致慢性低灌性脑缺血动物模型中，大鼠前脑区局部脑血流量和葡萄糖利用率均下降，而Rho激酶抑制剂HA1077可改善这些变化[12]。然而，Rho/Rho激酶信号通路是否参与慢性脑缺血所致认知功能障碍和神经元损伤？本实验中，我们采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制作慢性低灌性脑缺血模型，观察长期给予盐酸法舒地尔对模型大鼠学习记忆能力和突触传递功能的影响。此外，我们还探讨了药物发挥作用的可能机制。作者简介：黄琳(1982-)，女，药剂师，Tel:010-88325020，E-mail:linhuang621@hotmail.comlocatedintheTomb,DongShenJiaba

6、ng,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame111材料和方法1.1实验动物雄性Sprague-Dawley大鼠，体重180～220g，华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。大鼠随机分笼饲养，维持室温20~22℃，自由摄食与饮水，自然光照节律，每天提供足量的食物和水。1.2主要药品和试剂盐酸法

7、舒地尔(hydroxyfasudil，HF)，白色粉剂，纯度>98%，TocrisCooksonLtd.(Britol,UK)公司生产，批号040311，临用前用生理盐水溶解并稀释至所需浓度，注意避光；尼莫地平（Nimodipine）针剂，德国拜耳制药公司生产；兔抗鼠nNOS抗体购自SantaCruzBiotechnology；即用型SABC试剂盒及二氨基联苯胺(diaminobenzidine,DAB)显色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；PMSF、