卫生监测_食品微生物检验

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1、食品微生物实验室常用仪器及用途洁净工作台（超净工作台、无菌台）是一种供人操作的通用型局部净化设备，通过风机将空气吸入，经由静压箱通过高效过滤器过滤，将过滤后的洁净空气以垂直或水平气流的状态送出，使操作区域持续在洁净空气的控制下达到百级洁净度它可造就局部高清洁度空气环境。生物安全柜是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。高压灭菌锅烘箱培养箱分光光度计分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋

2、白定量以及细菌生长浓度的定量pH计离心机PCR仪原理：采用实时荧光PCR技术检测食品中是否有致病菌；灵敏度：对目标菌检测灵敏度为1个/g效率：检测过程用时2-4H主要耗材：各菌种试剂盒真空泵冰箱纯水机振荡器/均质机移液器其它仪器食品微生物检验技术主要内容1.微生物检测作业规范2.微生物检验流程3.常见卫生指标及致病菌4.测定微生物的大小5.测定微生物的数量6.菌落总数的测定7.大肠菌群的测定8.生产环境检测无菌操作基本技术用于防止微生物进入人体组织或其它无菌范围的操作技术称为无菌操作。如外科手术需防止细菌进入伤口及各种微生物实验中,为了防止其

3、它微生物影响实验的进行,也要在无菌的环境下进行。无菌操作的要求是:1操作前将界面上的细菌和病毒等微生物杀灭2操作过程中是界面与外界隔离,避免微生物的侵入一、在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区。二、执行无菌操作前，先戴帽子、口罩、洗手，并将手擦干，注意空气和环境清洁。三、夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。四、进行无菌操作时，凡未经消毒的手、臂、均不可直接接触无菌物品或超过无菌区取物。五、在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，并认真洗手和消毒。在操作时，严禁喧哗，严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等。倾

4、倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。对于吸管应先用手拿后1/3处，并用酒精灯烧烤之后再吸液体。无菌操作原则1、液体样品采样方法充分混匀后，无菌操作打开包装，用100mL无菌注射器抽取,注入无菌盛样容器.2、半固体样品采样方法无菌操作打开包装，用无菌勺子从几个部位挖取样品，放入无菌容器。3、固体样品采样方法大块整体食品用无菌刀具和镊子从不同的部位割取，并注意其代表性；小块大包装食品应从不同部位的小块上切取样品，放入无菌容器。若为检验食品的污染情况，可取表层样品；若为检验食品品质的情况，应从深部取样。常见卫生指标及致病

5、菌细菌总数大肠菌群霉菌和酵母菌大肠杆菌（肉制品）沙门氏菌（禽、畜肉）副溶血性弧菌（水产品）金黄色葡萄球菌（剩饭）单增李斯特氏菌（乳制品、冷藏食品）肉毒梭菌（发酵制品、肉制品）菌落总数的测定菌落的定义：将细菌接种在固体培养基上经18∽24小时培养，长出肉眼可见的来源于一个细胞的细菌集团。菌落总数：食品样品经过处理，在一定条件下培养后，所得1ml（g）样品中所含菌落的总数。检测意义：菌落总数常作为评价食品被污染程度的一个重要指标。预测保质期。菌落总数的检验程序25g(ml)样品+225ml生理盐水（0.85%）(1:10的稀释液)作几个适当倍数的

6、稀释液(例如1:100，1:1000)选择2~3个适宜稀释度各取1ml分别加入灭菌培养皿中平皿中加15~20ml营养琼脂（46℃），于36±1℃培养48h菌落记数/报告GB4789.2--2010（1）以无菌操作，将样品25g（或25mL）剪碎以后，放于含有225mL灭菌生理盐水三角瓶内，经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。固体样品在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000r/min-100000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。（2）用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管

7、内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。（3）另取1mL的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。样品稀释及培养1（4）对检样污染情况的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15mL-20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL生理盐水的灭菌平皿内作空白对照。（6）等琼脂

8、凝固后，翻转平板，置（36±1）℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1g（1mL）样品所含菌落总数。检样稀释及培养2样品稀释程序流程图