不同蜂胶制品的黄酮类组成分析和抗氧化作用研究i蜂胶制品的黄酮类组成分和清除dpph的作用

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1、巾罔养蜂学会蜜蜂产品铷lk委员会第七次学术研讨会会议沦文2006．11北京不同蜂胶制品的黄酮类组成分析和抗氧化作用研究-I．蜂胶制品的黄酮类组成分和清除DPPH的作用单斌1张智武2+孙丽萍2朱小丽2(1．南昌大学生命科学学院食品工程系；2．中国农业科学院蜜蜂研究所)摘要：本文通过不同方法制各的蜂胶制品以及其它具有类似抗氧化活性的植物提取物清除DPPH效能的比较研究，发现提取物中所含黄酮类化合物的种类越多，其清除DPPH效能越强，两者承现出J下相关关系；同时，清除DPPH效能也同所含黄酮类化合物的量

2、承现I叶{正相关关系；由此，认为采用含蜂胶A中所含黄酮类化合物种类较为伞面，同时也能保留较高的黄酮类化合物的含量，并具有较好的清除DPPH效能。关键词：蜂胶：高效液相；黄酮；DPPH；抗氧化开发和研制天然抗氧化剂，消除自由基对机体的损害作用，是目前医药和食品研究中的一个重点。调查发现，法国红葡萄酒消费餐居世界首位，红葡萄酒中含有大量多酚类化合物，它们可以有效地清除有害的氧自由基，抑制红细胞膜和低密度蛋白脂质的过氧化【】J。蜂胶是蜜蜂采集植物幼牙中的树脂并混入其上腭腺分泌物及蜂蜡等加j：而成的一种天

3、然物质，具有抗菌、消炎、抑制病毒、抗癌和护肝等作用【2J。国内外研究发现，蜂胶中的类黄酮和黄酮类化合物含量很高，在蜂产品中，蜂胶表现fJ5第一高的自由基消去活性，关于蜂胶抗氧化性作用的报道很多，一般认为从中分离出20多种p’41黄酮类化合物，可能是其发挥生物活性的有效成份。本文通过对4种蜂胶制品的高效液相分析接合蜂胶抗氧化性能研究，试图找出蜂胶中黄酮类化合物种类丰富程度与抗氧化能力高低之间的关系，并以此为基础找到能较高保持蜂胶抗氧化能力的生产工艺。1材料与方法1．1材料精制蜂胶(中蜜科技有限公司提

4、供，食品级)；蜂胶A、蜂胶B、蜂胶C(实验室自制，食品级)：2，2-二苯基一1一苦味肼基自由基(2，2-Diphenyl-1-picrylhydr-azyl，freeradical简称DPPH·)：美国Sigma公司产品；甲醇(色谱纯)；葛根、枸杞、枳棋子、茯苓、五味子、银杏、柠檬、柑桔皮、竹叶、油菜花粉等为食品级；芦丁、杨梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松鼠素、柯因、高良姜素为标准品：美国Sigma公司产品。1．2仪器和设备DZF-6090犁真空干燥箱，上海一恒科技仪器有限公司；KQ一50DB型数

5、控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司：UV-2100型紫外可见分光光度计：美国UNICO公司；LC．20AB型高效液相色谱仪：日本岛津公司。1．3实验方法1．3．1植物活性成分的超声萃取15]称取干燥后的葛根、枸杞、枳棋子、茯苓、五味子、银杏、柠檬、柑桔皮、竹叶、油菜花粉；各2．00g，分别用30mL甲醇在常温下超卢提取30min，在4000xg‘通讯作者48中同养蜂学_会蜜蜂产品专业委∞会第七次学术研讨会会议论文2006．11北京下离心20min后过滤，滤渣再提取一次，合并滤液，弃去滤渣。将所

6、得滤液用旋转蒸发器浓缩，加甲醇定容至10mL备用。1．3．2蜂胶制品中活性成分的超声萃取巧1取真空干燥的三种蜂胶制品(本实验室自制)；分别称取2．009如上法萃取活性成份，加甲醇定容于10ml备用。1．3．3色谱检测标样制备哺1分别精密称取芦丁、杨梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松鼠素、柯因、高良姜素标样2．0mg于50m的容量瓶中，用甲醇溶解定容，摇匀备用。1．3．4甲醇提取物对DPPH自由基的清除作用【5l根据预试验结果，各样品可稀释10倍或50倍后分别移取5、15、25、35、45、55山样品

7、甲醇提取物溶液稀释至2．0ml及2x10-4mol／LDPPH溶液2．0ml加入同一试管中用旋涡混合器混匀，静置30min后片j溶剂作参比测定其吸光度Af．同时测定2x104mol／LDPPH溶液2．0mL甲醇溶剂混合后的吸光度Ac，以及经同法稀释的提取液2．0mL与2．0mL溶剂混合后的吸光度A，，根据公式计算抑制率抑制率=【l一(Ai-Aj)／Ac]x100％。1．3．5半抑制量的计算和清除能力的评价【l】根据不同样品的清除【DPPH．】自由基的曲线。计算得到[DPPH·】的原始质量浓度减少至

8、50(稳定态)时样品的添加量(EC50)，引用一个新的参数一自由基清除能力AE(Antiradicalefficiency)，AE=1／ECso。根据AE的大小判断抗氧化剂清除自由基的能力的人小，AE越大其清除自由基能力越强。1．3．6高效液相色谱分析方法H’将制各好的各样品稀释至400mg／nll，经0．45微米的滤膜过滤，取样10微升进行分析；色谱柱采用SYMMETRYC18．流动相为甲醇+水(55+45)(用磷酸调至pH=2．0)；流速为0．7ml_／rnin；在270nm处