光黄素荧光法测定尿中核黄素的研究

《光黄素荧光法测定尿中核黄素的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、维普资讯http://www.cqvip.com第26卷第5期营养学报Vo1．26．NO．52004年l0月ACTANUTRIMENTASINICA0ct．．2004光黄素荧光法测定尿中核黄素的研究罗仁才，黄磊，王正，周滢，胡冬梅，张楠，(北京市疾病预防控制4-一,12，北京100013)I摘要l目的：改进光黄素荧光法测定尿中核黄素的含量。方法：参考日本卫生试验法食品中核黄素的测定方法，利用核黄素分解为光黄素这一反应，以光黄素荧光法定量测定尿中核黄素含量。结果及结论：改进方法简便、快速，相对标准偏差1．11％～9．5

2、1％，加标回收率92．8％～100％，准确度及精密度均能满足分析要求。关键词：核黄素；光黄素；尿中图分类号：R151．42文献标识码：A文章编号：0512—7955(2004)05—0396—04核黄素营养状况的常用评价方法是测定尿素粉状结晶置浓硫酸干燥器中干燥24h，精密中核黄素含量。尿中核黄素的测定方法有微生物称50mg溶于400ml蒸馏水，加冰醋酸1．2ml，法、高效液相色谱法和荧光法⋯等，微生物法手温水溶解，冷却后再稀释至1000ml，贮于棕续繁琐，仅在早年使用，现已不用。高效液相色色瓶中，加少许甲苯，4℃冰

3、箱储存。谱法不成熟，且需要一定的设备，成本高、速度核黄素标准工作液(0．5gg／m1)：量取慢。目前我国常用硅镁吸附剂净化荧光法，此1．0ml核黄素标准贮备液，用0．01mol／L盐法测定过程要求避光并尽快完成，操作条件难控酸稀释到100ml，移入棕色试剂瓶中，4~C冰箱制，并且效率低，大批量测定较困难。尿中核黄保存，3日内使用。素大多以游离形式存在，游离核黄素对光极为敏1．2尿样感，碱性条件下光照下即分解产生光黄素，光黄为2002年全国营养调查收集北京部分小学素的三氯甲烷溶液具有较强的荧光发射，在生夜尿，同时测定肌

4、酐与核黄素排出量以评价核250min内荧光强度是稳定的，且不受光的影黄素营养状况。事先在60ml塑料瓶中加3g响，故可在最佳激发波长450nm、最大发射草酸，收集尿后放于一20℃冰箱保存。波长510nm处测定。本研究参考文献研究1．3实验方法改进了光黄素荧光法测定尿中核黄素含量。1．3．1尿样处理：实验前一天将冰冻尿液置于阴暗处，自然解冻。1材料与方法1．3．2尿样测定：取上清液1ml置于25ml比1．1仪器与试剂色管中，加4ml氢氧化钠溶液，摇匀，于灯仪器：荧光分光光度计，日立F一3010；试(100W白炽灯泡，距

5、离25cm)下照射60min剂：氢氧化钠溶液(2mol／L)；高锰酸钾溶后，加0．5ml冰醋酸，摇匀，此为样品T管；液(0．25mol／L)；冰醋酸；过氧化氢；三氯同时另取上清液1ml于另一个25ml的比色管甲烷；以上试剂均为分析纯或优级纯。中，先加0．5ml冰醋酸，混匀，再加4ml的核黄素标准贮备液(50ng／m1)：将核黄氢氧化钠溶液，混匀于暗处放置60min，此为样品空白K管。分别向T管、K管中加入高锰酸收稿日期：2003l0—13基金项目：2002年北京市居民营养与健康状况调查项目钾溶液0．1ml，摇匀，放置

6、片刻，加过氧化氢作者简介：罗仁才(1964～)，男，副主任检验师维普资讯http://www.cqvip.com5期罗仁才等．光黄素荧光法测定尿中核黄素的研究397卧船邶3滴，摇动使之褪色，然后加入10ml三氯甲实验要求。故选择加入4．0ml的氢氧化钠，其烷，剧烈振摇1min，静置分层后，取出三氯甲荧光强度已基本达到最大值，且pH值也符合本烷层，于激发光450nm处发射光510nm处测试验要求。定荧光强度。2．2校正曲线和线性范围1．3．3标准溶液的测定：取1ml核黄素标准工分别测定含0，1，2，3，4，5，10g的

7、作液(0．5~tg／m1)于25ml比色管内，同时做标核黄素标准溶液经光解、氧化、10ml三氯甲烷准T和空白K管，以下操作同尿样测定。提取后的荧光强度，绘制工作曲线(图1)，得1．4计算回归方程为y=17．976x+4．3324，相关系数r=O．9984x：三二×S×TB—KBM尿样中核黄素含量(~g／m1)样品测定管的荧光强度样品空白管的荧光强度标准管的荧光强度标准空[J管的荧光强度标准溶液浓度(0．5ug／m1)标准液取样量(1m1)尿样取样量(1m1)Concentration(“g／m1)m一。2345678

8、Fig．1Standardcurve2结果2．3最低检出量2．1pH值对荧光强度的影响本法的最低检出量为0．03gm、n=一～g2舶o。O肿o7mo9肿o8加oo5●o5川4核黄素在碱性条件下易于被破坏，故尿液2．4方法的精密度应加过量草酸以利于核黄素的保存。由于核黄素对不同样品进行6次平行测定，相对标准是在碱性条件下分解为光黄素，因此，氢氧化