抗稻瘟病基因pi3的定位

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1、万方数据第22卷2007拄第1期2月云南农业大学学报JournalofYunnanAgriculturalUniversityV01．22No．1F毛b．2007抗稻瘟病基因Pi一3的定位水许风华1，涂香明1，李顺德2，何月秋¨+(1．云南农业大学植物保护学院，云南昆明650201；2．玉溪市农业局，云南玉溪653100)摘要：利用C039近等基因系中的C104PKT和A57—119及其杂交F2代为材料，在水稻第9染色体上找到了5个与Pi一3基因紧密连锁的分子标记R14，JJll3，JJ6782，JJ6242和G103，它们与Pi～3间的遗传距离分别为1．7cM，5．4cM，16．2c

2、M，21．7cM和6．9cM。关键词：Pi一3；分子标记；基因定位；稻瘟病中图分类号：S435．11I．41文献标识码：A文章编号：1004—390X(2007)Ol一0138-03LocalizationoftheBlastResistanceGenePi．．．3onRiceChromosomeXUFeng—hual，TUXiang—min91，LIShun—de2，HEYue—qiul(1．FacultyofPlantProtection，YAU，Kunming650201，China；2．AgriculturalBureauofYuxi，Yuxi653100，China)Abst

3、ract：FivemolecularmakersR14，JJll3，JJ6782，JJ6242andG103linkingwithPi一3，theblastresistancegene，withadistanceof1．7cM，5．4cM，16．2cM，21．7cMand6．9cMonriceChromo—somo9werefoundbyusingbothparentsC104PKTandA57，andtheirF2progenieswithC039back—groundinthisstudy．Keywords：Pi一3；molecularmarker；genelocation；bla

4、st水稻基因组测序的完成及分子标记种类和数量的大量涌现带动了稻瘟病抗性基因的定位和克隆。水稻抗稻瘟病基因Pi一3是一个具有广谱抗性的主效显性基因，找出分子标记和定位该基因对克隆和聚合育种具有重要意义。1材料和方法1．1材料水稻品种是水稻C039近等基因系的品种C039，C104PKT(携带Pi一3)，A57—119(携带Pi一1，Pi一2)及杂交组合C104PKT／A57—119的250个F，代植株和F，家系。供试稻瘟病菌株B97414能侵染携带Pi一1，Pi一2和Pi一4a的品种，但不能侵染携带Pi一3的品种。所有材料均种在国际水稻所温室，当苗龄处在3．5—4．0叶时，采用喷雾方法在

5、人工气候箱中接种和保湿。1．2方法水稻DNA的提取按常规方法进行。分子定位采用逐级推定法，即在确定了一个标记在染色体上的位置后，再依据该标记与Pi一3基因问的遗传距离和水稻基因组序列数据库，设计引物扩增多态性条带，进行基因定位。首先用500条随机引物和270对微卫星引物扩增及用EcoRI，EcoRV，XbaI，BamHI，BdII，HindⅢ，DraI，HaeⅢ等8种内切酶完全酶切两个亲本C104PKT，A57—119和轮回亲本C039的DNA，再以水稻和玉米上的抗病候选基因R2，R4，R5，R6，R7，R8，R10，R13，R14，R15，R16，CGl，CG2，CG3，CG5，CG

6、6，CG7，CG9，CGl0，CGll，CGl2，CGl3，CGl4，CGl5，CGl6，CGl7，CGl8，CGl9，CG20，CG21，CG22，CG23，收稿日期：2006—06—07}基金项目：国家863项目(2001AA211061)；云南省863配套项目(2003GP06)；国家转基因专项(J99一A一015)；云南省人才基金项目(99C10010R)。$$通讯作者作者简介：许风华(1981一)，女，山东临沂人，在读硕士研究生，主要从事抗稻瘟病基因定位工作。万方数据第1期许风华，等：抗稻瘟病基因Pi一3的定位139CG24，CG26，CG27，CG30，CG32，CG33，

7、CG34，CG35，CG36，CG38，CG41，CG43，CG44，CCA6，CG47，CG49，CG51，CG52，CG64，CG78，CG89，CG95，CG97，CG98(美国堪萨斯州立大学植物病理系JEANL博士惠赠)作为探针，以化学荧光标记法进行分子杂交，寻找与Pi一3基因连锁标记。再利用最初确定的标记序列信息，在日本的RGP网站或NCBI的Genbank中进行搜索，开展下一轮引物设计，寻找更多分子标记。将F：代抗病性和所有分子标记