枯草芽孢杆菌b9601y2基因组文库的构建

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1、万方数据第22卷第6期2007年11月云南农业大学学报JournalofYunnanA—culturalUniversityVoL22NO6NOV．2007枯草芽孢杆菌B9601一Y2基因组文库的构建苏春丽1，何月秋2一(1．云南农业大学，农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实骑室，云南昆明6502012．云南农业大学农学与生物技术学院，云南昆明650201)摘要：枯草芽孢杆菌B9601一K是一个具有防治植物病害和促进植物生K的专利菌株。本文采用Sau3A1部分酶切的DNA、粘粒载体pLARF一5和PackagenexDNA包装系统。构建了该菌株基因组文库。文库总量为11000

2、个克隆，插入片段平均长度为14．77kb．按9999％的概率计算，文库覆盖了基因组42次。这为恢菌株防治病害和促进植物生长机理研究奠定了物质基础。关键词：枯草芽孢杆菌B9601一L；基同组文库；粘糙载体中图分类号：Q933文献标识码：A文章编号：1004—390X(2007)06—0799—03ConstructionofaGenomicLibraryofBacillussubtifisB9601一Y2SUChun—lil．HEYUE-qiu2(1TheKeyh啪oqforAe4culturMBiodiversltyfor№ManagememofCknaEductionMims

3、竹，YunnanAgrieuhuralUniversity，Ktmming65ff201，China；2F耻ultyofAgronamics蛐dBiotechnology，yunnanAgriculturalUnivetsity，K=min9650201，China)Abstract：BacillussubtilisB9601一Y2is8patentedbioagentcontrollingfungaldiseasesandpromotinggrowthofplants．ItsgenomicDNAhbraryWO．Sconstructedbypartialdigestionwi

4、thSau3AIandcosmidvectorpLAFR-5followingthePackageneLambdaDNAPackagingSystemThelibrarycontairm110C0cloneswitbanaverageof14，77kbinsert，coverin94．2genomicequivalencesunder99．99％probability，whichprovideswithbasistheresearchonmechanismsofcontrollingdiseasesandpromo-ringgrowthforthebacterium．Keywo

5、rds：BacillussubtilisB9601一Y2；genomiclibrary；Coslnidvector枯草芽孢杆菌(BacillussubtiIis)B9601一Y2是一株具有广谱抑菌作用uo及促进植物生长作用、极具广泛开发应用前景的专利菌株(专利号：ZL2003101041956)。它的代谢产物对多种植物病原真菌如：辣椒疫病菌(Phytophthoracapsici)、黄瓜炭疽病菌(Colletotrichumorbiculare)、棉花红腐病菌(Fuaariummoni@，rme)、水稻稻瘟病菌(Magnaporthegrisea)、小麦根腐病菌(B枷laris

6、”rokiniana)等具有较强抑制作用”1。它对富贵竹、月季、常春藤、白菜、蕹菜”]、水稻、小麦、大蒜等均有非常好的促生长和促生根作用。枯草芽孢杆菌的基因组已完成了测序⋯。促生长相关基因植酸酶也已被克隆阻”。但为了更深人地了解B9601一Y：的防病和促生长机制，本研究以粘粒pLARF一5⋯为载体，构建其基因组文库。1材料与方法1．1材料菌株B9601一Y：为实验室保存并专利了的菌株，载体pLAFR一5由中国农业大学张力群博士惠收稿日期：2007—04—02修回日期：2007—04—1l}基金项目：国家自然科学基金(31)660007)。··通讯作者：E—mail：heyueq

7、lu@tomcorR．作者简介：苏春丽(1982一)，女，云南宾川人，硕士研究生，主要从事分子植物病理学研究。万方数据云南农业大学学报第22卷赠．携带四环素抗性基因(Tet。)，经大肠杆菌DH5a增殖。限制性内切酶Sau3AI，BamHI，ScaI，EcoRI购自华美生物公司，O’GeneRulei．TMlkbDNA[adder(#SMll63)购自晶美生物公司。T。DNA连接酶，包装蛋白购白Promega公司，四环素购自北京百泰克生物技术有限公司。其他化学药品均为市售分析纯。12方法12．