海参体壁酸溶性胶原提取及氨基酸组成分析

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1、海参体壁酸溶性胶原提取及氨基酸组成分析高杨，董秀萍，肖桂华，江慧敏，朱蓓薇1(大连工业大学生物与食品工程学院，辽宁大连，116034)2(江苏大学食品与生物工程学院，江苏镇江，212013)摘要以海参体壁为原料，采用乙酸溶剂法提取酸溶性胶原。以酸溶性胶原得率为指标，通过均匀设计试验确定了乙酸溶剂法提取酸溶性胶原的优化条件：温度为4℃，乙酸浓度为0．5mol／L，料液比为1：1000，提取时间为72h，在此条件下酸溶性胶原的得率可达到胶原纤维原料的7．35(质量分数)。氨基酸组成分析表明，海参体壁酸溶性胶原的甘氨酸(Oly)含量为33．6，羟脯氨酸

2、(Hyp)含量为7．O4％。关键词海参，酸溶性胶原，提取，均匀试验，氨基酸组成海参属棘皮动物门，是海洋无脊椎动物中的一种2KBTES一55型真空冷冻干燥机，Virtis(美国)；z典型动物[1]，海参体壁是海参主要的食用部位，主要323K型冷冻离心机，HERMIE(德国)；UV一2100分由上皮组织和真皮结缔组织构成，其体壁蛋白质的光光度计，UNIC(美国)；YC一1层析实验冷柜，博医4O以上为胶原蛋白。海参体壁胶原主要由胶原纤康实验仪器有限公司；EMS一4B磁力搅拌器；202—3一S维组成，见于报道的有不溶性纤维和可溶性纤维2型电热恒温干燥箱，

3、跃进医疗器械厂；JJ2OOY型精密种¨2]。胶原是由3条肽链共价交联而成的螺旋形纤电子天平，美国双杰兄弟(集团)有限公司。维状细胞外蛋白质，不易溶于水及碱性溶液，一般常1．2实验方法见的提取方法有酸法和酶法l_4]。酶法中用胃蛋白1．2．1海参体壁胶原纤维原料的提取酶处理胶原纤维可以催化水解胶原端肽非螺旋区，而提取方法参照文献]。对螺旋区无作用，可使胶原溶解量增加。酸法通过破1．2．2酸溶性胶原的提取步骤坏分子间盐键和Schiff碱引起纤维膨胀、溶解，虽溶准确称取0．05g海参体壁胶原纤维，在选取提解量少，但活性保持更好。由于海参体壁中胶原的提取

4、时间、提取料液比(W／V)、提取溶剂乙酸的浓度取只见于对海参体壁酶促溶性胶原的提取报道E6,7]，后，按一定比例加入一定浓度的乙酸进行提取，进行对酸溶性胶原的研究则鲜见报道，因此本文对海参体单因素实验及均匀试验，确定优化条件下酸溶性胶原壁酸溶性胶原提取条件进行优化，并对其进行氨基酸(acidsolublecollagen，ASC)的提取率。组成分析，为进一步研究海参体壁胶原的组成与功能1．3测定方法[9]特性，及其在加工及贮藏过程中的理化性质变化提供1．3．1L一羟脯氨酸标准溶液的配制科学依据。精确称取L一羟脯氨酸标准品50mg，用水溶解并1材料

5、与方法定容到50mL，得到1mg／mL的对照品标准溶液。1．3．2标准曲线的绘制1．1材料与仪器准确吸取L一羟脯氨酸标准液1mL，用蒸馏水定1．1．I材料与试剂溶至100mL，使其浓度为10~g／mL，分别吸取上述新鲜刺参(seacucumber，Stichopusjaponi—溶液3mL，6mL，9mL，12mL，15mL，用蒸馏水定CUS)，购自大连长兴水产品市场；乙酸、NaOH、HC1溶至100mL，使其浓度为0．3，0．6，0．9，1．2，1．5g／等试剂均为分析纯。mL，以蒸馏水为空白，分别吸取最终标准液1mL，加1．1．2仪器与设备入

6、1mL柠檬酸缓冲液(pH6．o)和1mL氯胺T溶第一作者：硕士研究生(朱蓓薇教授为通讯作者)。液，在室温下氧化10min后加入1mL60(质量分*国家自然科学基金项目(30571449)；科技部国际重大合作项数)高氯酸，放置10min，然后加入lmL对二甲基氨目(2006DFA32580)；国家重点基础研究发展计划(973)项目(2006CB70821O)基苯甲醛发色剂，65℃水浴20min，冷却后在560nm收稿日期：2008一O7—11下测定吸光度值A。以L_羟脯氨酸标准液的浓度(g／生蔓鲞蔓塑(璺蔓塑2f171FOODANDFERMENTA

7、T10NINDUSTRIESlm1)为横坐标，以其吸光度A为纵坐标作标准曲线。回胶原的溶解量不断增大，因而ASC得率也会不断增归方程为一0．0695x一0．0011，R一0．9985。加；但由于胶原不稳定，长时间的搅拌和浸泡容易导1．3．3提取率的测定致其变性，故超过72h后提取率趋于平衡，因此确定取提取后的酸溶性胶原溶液1ml，加入2m16理想提取时间为72h。mol／LHC1，130℃水解4h之后取1mL水解液，用22．2提取料液比(g：砒)对酸溶性胶原提取率的影响mol／LNaOH溶液滴定中和至pH6．0，定容至l0在乙酸浓度为0．5mol

8、／L，4℃搅拌反应72h的mL。取定容后样品液1mL，按1．4．2方法测定吸光条件下，考察不同料液比对ASC得率的影响(如图2度值，以蒸