五种蜂花粉抗氧化能力及其黄酮含量比较研究

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1、五种蜂花粉抗氧化能力及其黄酮含量比较研究唐琳王泽宋(山东师范大学生命科学学院，山东济南250014)摘要采用DPPH法和FRAP法分别对油菜、苦菜、玉米、桂花和向日葵等五种蜂花粉的抗氧化活性进行了测定，并与花粉中的黄酮含量进行比较。结果表明，油菜花粉的黄酮含量最高，其抗氧化活性也最大，其次是苦菜。其余三种花粉黄酮含量的高低与两种方法的测定结果没有对应关系。关键词花粉抗氧化活性DPPH法FRAP法黄酮中图分类号：$897．3现代研究认为，蜂花粉中含有许多种活性成分，其中黄酮类、维生素类等都是抗氧化物质，因此蜂花粉在防治人类一些与自由基损伤相关的疾病以及抗衰老过

2、程中可能起着十分重要的作用【lJ。为此我们采用铁离子还原／抗氧化力测定法(ferricreducing／antioxidantpowerassay,FRAP法)和DPPH法对油菜、苦菜、玉米、桂花和向日葵等五种蜂花粉的甲醇提取液的抗氧化活性进行了比较测定，并探讨其与蜂花粉中黄酮含量的关系，以期为开发蜂花粉的抗氧化功能性方面提供一些实验依据。1材料与方法1．1主要仪器和试剂紫外．可见分光光度计(UV-1700，日立)；高速冷冻离心机(Eppendorf5417R，德国)：超声波细胞粉碎仪(JY88一II，宁波新芝科学仪器研究所)；一SZF．06脂肪测定仪(上海

3、新嘉电子有限公司)；电子天平(Sartrius)。二苯基苦基苯肼(1，1-diphenyl一2．picrylhydrazyl，DPPH)；Fe3+．三吡啶三丫嗪(tripyridyl·triazine，TPTZ)，均为Sigma公司产品。芸香叶苷(芦丁)，丁基羟基甲苯(BHT)，为国药集团上海化学试剂公司产品。其他试剂均为国产分析纯。油菜、苦菜、玉米、向日葵、桂花等五种蜂花粉由山东省点宝蜂产品公司提供。1．2实验方法’1．2．1蜂花粉提取液的制备蜂花粉浸入液氮20min，取出研磨(液氮中)。准确称取1．0009蜂花粉，分别加入1．00ml双蒸水与4．00ml

4、甲醇，冰浴超声处理20min，12000r／min离心20min，取上清液用双蒸水定容至25．0ml，用于抗氧化活性的比较测定。再准确称取1．0009蜂花粉加10．Oml甲醇50。C回流提取1．Oh，过滤，滤纸及滤渣再用10．0ml甲醇50℃回流提取0．5h，过滤。合并滤液，用甲醇定容至25．0ml，用于黄酮含量的测定。1．2．2蜂花粉总抗氧化活性的FRAP法测定·参考Benziet2】的方法略作改进。该方法的原理是利用Fe3+．三吡啶三丫嗪(TPTZ)可被样品中还原物质还原为Fe2+，呈蓝紫色，在波长593nm处有最大光吸收，根据吸光度值的大小，可计算样品

5、抗氧化活性的强弱。反应体积为4．OOml，取200ul蜂花粉提取液，加入1．80mlTPTZ工作液(由O．3mol／L醋酸盐缓冲液25．0ml，10mol／LTPTZ溶液2．50ml，20mol／LFeCL3溶液2．50mL组成)和2．OOml双蒸水，混匀后37。C反应10min，测定593nm处的吸光度值，以1．0mmol／LFeS04为标准，样品的抗氧化活性(FRAPValue)以达到同样吸光度值所需的FeS04毫摩尔数表示。1．2．3蜂花粉消除有机自由基(DPPH)能力的测定反应总体积3．00ml。取稀释10倍的蜂花粉提取液100ul、120ul、14

6、0ul、160ul、180ul，分别加入200啪。儿DPPH溶液(用50％乙醇配制)1．90ml，摇匀，室温静置20rain，以50％乙醇溶液调零，测525砌处的吸光度值A；以DPPHl．90ml力l：1100ul、120ul、140ul、160ul、180ul蒸馏水作空白对照(Ao’)；以lOOul、120ul、140ul、160ul、180ul蜂花粉甲醇提取液加1．90m150％乙醇溶液为样品空白(Ao)。：蜂花粉甲醇提取液对DPPH的清除百分比=1一【(A—Ao)／Ao’】×100％1．2．4蜂花粉总黄酮含量的测定[31精确量取1．00ml蜂花粉甲醇提

7、取液，分别加入0．1mol／L三氯化铝溶液1．00ml，1．0mol／L醋酸钾溶液1．5ml，用甲醇定容至5．OOml。摇匀，静置30min，以试剂做空白，测定520nm处的吸光度值，以芦丁为标准品，测定花粉的总黄酮含量。‘2结果与分析2．1FRAP法测定5种蜂花粉的总抗氧化活性所测的五种蜂花粉中，抗氧化活性以油菜最强，其次是苦菜和桂花，向日葵最弱，最强与最弱相差2倍。(表1)表1五种蜂花粉的抗氧化活性比较(mmol／lOOmg，x士s，n．5)花粉FRAPValue油菜苦菜桂花玉米向日葵0．4237±0．00780．3988±0．01690．3285±0．

8、01500．2682-4-0．01090．2l13±