蜂胶提取物对禽流感h9亚型shandongchicken98株的灭活作用效果研究

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1、2004学术年会蜂胶提取物对禽流感H9亚型Shandong／chicken／98株的灭活作用效果研究沈志强，王艳，李峰，刘吉山，吴信明，赵蕾，苗立中山东省畜禽用蜂胶疫苗研究开发推广中o，山东省滨州畜牧兽医研究所滨州256600摘要：本文通过鸡胚接种的方法就蜂胶乙醇浸出物对禽流感H9亚型Shandong／chicken／98株的灭活作用进行了研究。结果表明，常温下3分钟、30分钟，37℃3分钟、30分钟，含蜂胶乙醇浸出物0．1mg／ml的95％乙醇稀释液，含蜂胶乙醇浸出物2．5mg／ml的475％乙醇稀释液，含蜂胶乙醇浸出物10mg／ml的生理盐水稀释液，接种鸡胚后病毒HA测定为0

2、。这充分说明以上浓度蜂胶乙醇浸出物对禽流感H9亚型Shandong／chicken／98株具有完全的灭活作用。37。C3分钟、30分钟，含蜂胶乙醇浸出物01．mg／ml的47．5％乙醇稀释液，含蜂胶乙醇浸出物6．25mg／ml的生理盐水稀释液对禽流感H9株有部分灭活作用。关键词：蜂胶；禽流感；H9亚型；灭活作用蜂胶(Propolis)是蜜蜂从植物的树芽、树皮等部位采集的树脂，再混以蜜蜂舌腺，蜡腺等腺体的分泌物，经蜜蜂加工转化而成的一种胶状物质。蜂胶内含有多种酸类、醇类、酚类、酮类、醚类、酯类、烯烃和萜类化合物以及20多种黄酮类化合物，还有多种氨基酸、酶和多糖、脂肪酸以及vA、vB

3、、v，等多种维生素。蜂胶中有效成分之复杂，使其成为一种具有广谱生物学活性的天然物质，可以提高机体的免疫功能，具有抗病菌、霉菌、病毒与原虫等作用。本文通过鸡胚接种的方法就蜂胶乙醇浸出物对禽流感H9株的灭活作用进行了试验观察。1材料与方法1．1试验材料天然蜂胶由山东某蜜蜂养殖场提供，试验毒株禽流感H9皿型Shandong／chicken／98株(ELD50为10‘77／0．1m1)由本所传代保存，10日龄鸡胚由山东省滨州畜牧兽医研究所畜禽良种试验基地提供，95％乙醇购自山东某酒厂，生理盐水由本所按常规配制，l％红细胞由本所按常规配置。1．2试验方法1．2．1蜂胶乙醇浸出物的提取按沈志

4、强方法进行。1．2．2蜂胶乙醇浸出物对禽流感H9亚型Shandong／chicken／98株的灭活作用将蜂胶乙醇浸出物分别用95％乙醇、47．5％乙醇与生理盐水稀释，使蜂胶含量(mg／m1)分别为25、12．5、10、6．25、5、2．5、1、0．1。将禽流感H9亚型Shandong／chickerd98株(ELD50为10“7／0．tmt)用生理盐水做1000倍稀释，即病毒含量为10～ELD50分别与上述含蜂胶乙醇浸出物稀释液等量混合，根据作用温度不同分为两个试验组，一组常温下分别作用3分钟、30分钟，另一组37。C分别作用3分钟、30分钟。然后各接种10枚lO日龄健康鸡胚，接

5、种量为0．2ml／枚。另分别取95％乙醇、47．5％乙醇、生理盐水与10一ELD50的禽流感亚型Shandong／chicken／98H9株病毒液等量混匀，连同10～ELD50的禽流感H9亚型Shandong／chicken／98株病毒液作为对照组，各接种lo枚10日龄健康鸡胚，接种量为0．21111／枚。将上述接种后的鸡胚置孵化器中孵化。2004学术年会1．2．3HA测定将24小时内死亡的鸡胚弃去，48小时后死亡的鸡胚连同孵化至96小时的活胚按试验组别，分别收取各稀释度全部鸡胚尿囊液，B微量法测定其HA。1．2．4切胚体观察分别取生理盐水、12．5％蜂胶乙醇浸出物接种l0日龄健

6、康鸡胚各l0枚，接种量为o2ml／枚。将接种后的鸡胚置孵化器内孵化96小时，观察胚体变化。2结果2．1HA钡0定B微量法测定试验各组别鸡胚尿囊液HA，具体结果见表一，同时测定对照组各组别鸡胚尿囊液HA，具体结果见表二。2．2胚体观察分别取接种生理盐水、12．5％蜂胶乙醇浸出物鸡胚胚体观察，两者均生长良好，无任何差异性变化。表1试验各组别HA测定结果(xL092)蜂胶乙醇浸出物浓度(m∥m1)组别2512．510625525l0l3A0O分BO0O010常温钟C01011ll1l30AO0O分B0O0O010钟CO1011ll3AO0O分BO0O046钟CO081037℃30A0O

7、0O分B046钟C0810表2对照各组别HA测定结果(xL092)组别95％乙醇+种毒47．5％乙醇+种毒生理盐水+种毒种毒稀释液常温3分钟111l30分钟101137℃3分钟61030分钟610说明：“A”组以95％乙醇为稀释剂，⋯B组以47．5％L醇为稀释剂，⋯C’组以生理盐水为稀释剂3小结与讨论3．1试验结果表明，常温下3分钟、30分钟，37℃3分钟、30分钟，含蜂胶乙醇浸出物olmg／ml的95％乙醇稀释液，含蜂胶乙醇浸出物2．5m∥ml的475乙醇稀释液，含蜂胶乙醇浸出