透骨消痛颗粒影响骨性关节炎软骨基质及软骨下骨的组织化学观察

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1、o2007每=-Jo月一2008年9月芏璎论文F-透骨消痛颗粒影响骨性关节炎软骨基质及软骨下骨的组织化学观察黄云梅1．3,4陈文列1,3．4刘献祥Z．3．4吴追乐2吴广文2李明波2黄美雅1·3·4林如辉1,3,4李民2李西海Z,3·4(1．福建中西医结合研究院重点实验室．福州350108；2．福建中西医结合研究院骨病研究所，福州350108；3．福建省高校中西医结合基础重点实验室(福建中医学院)．福州350108；4．福建省中西医结合老年性疾病研究重点实验室(福建中医学院)。福州350108)摘要目的：探讨透骨消痛颗粒

2、对兔膝骨性关节炎软骨细胞外基质及软骨下骨的影响。方法：取新西兰大白兔36只，雌雄各半，根据改良Hulth法制作骨性关节炎模型。动物随机分成正常对照组、骨性关节炎模型组和透骨消痛颗粒实验组各12只，术后8周／12周取材．采用石蜡切片HE染色、PAS染色和V—G染色法，观察膝关节软骨、软骨下骨和软骨细胞外基质的变化。结果：模型组关节软骨完整性被破坏，结构紊乱，软骨细胞变性；软骨下骨厚度变薄．骨质囊性变，部分骨组织坏死；V-G染色表明软骨和骨胶原含量减少。结构紊乱；PAS染色可见软骨蛋白多糖含量减少。实验组与模型组相比，组织

3、结构有明显改善，蛋白多糖和胶原的含量增加。结论：透骨消痛颗粒对实验性兔膝骨性关节炎组织具有修复作用，这可能与其增加软骨蛋白多糖和骨胶原的含量及对软骨下骨的调节有关。关键词骨性关节炎；透骨消痛颗粒；蛋白多糖；胶原纤维；PAS染色法；V-G染色法基金项目福建省自然科学基金项目(N0．C0710030)通讯作者陈文列。Tel：059l一22861163．E-mal1：Chen．w1@163．com骨性关节炎(Osteoarthritis，0A)是中老年人常见的慢性进行性骨关节病，严重威胁病人的生活质量，目前尚无根治的方法。透

4、骨消痛颗粒是以”肾主骨”、”肝主筋”、”膝为筋之府”等中医理论为指导，针对骨性关节炎组方，临床用于防治骨性关节炎效果肯定【lI，但其作用机理仍需进一步研究。本实验通过建立兔骨性关节炎模型，采用常规石蜡切片HE染色、PAS染色和V—G染色法，从组织形态学上观察和分析透骨消痛颗粒的作用，为l临床运用提供基础理论依据。材料和方法1．1动物分组和取材健康6月龄新西兰大白兔36只，雌雄各半．由上海医用动物实验中心提供，合格证书：SCXK(沪)2002-oOll。实验在福建中医学院实验动物中心进行。动物随机分成空白对照组、骨性关节

5、炎模型组和透骨消痛颗粒实验组各12只。模型组大白兔采用改良Hulth法造模121，取兔膝关节内侧人路，切断内侧副韧带，摘除内侧半月板，切断前交叉韧带；术后连续3天给青霉素20万单位肌肉注射，l周后开始每天强迫兔活动0．5小时。实验组为给造模成功的大白兔于术后l周开始治疗。以透骨消痛颗粒(巴戟天、淫羊藿、白芍、青风藤、制川乌、泔苍术、防风、当归、川芎、怀牛膝、羌活、独活等，由福州屏山制药厂制作)水溶液5ha(含透骨消痛颗粒19)灌胃，每日1次；术后8周，12周取材。空白对照组不做任何处理，同时取材。1．2常规石蜻切片眦染

6、色动物处死后，迅速切取实验侧股骨内髁关节软骨，修成0．5crux0．5cmX一203———。碜4t¨·t“十Htm2嘲${}{女n女l05rrn人小的组4{块，10ffr甲雕阎定．IO％EDrA常温脱钙4周，幕列脱水、透明、石蜡包埋，切片4Wm；常规脱蜡、苏木牺染色【O讣钟，水洗，】％盐酸酒精分色数秒．水洗返蓝．伊红染色1分钟．酒精脱水，二甲苯透明，中性树脞封片1．3V—G染色石蜡切¨常规脱蜻至水．Weigen氏铁苏木素液染色5一lO分钟．充分水洗后．干va口Ciemn氏渡巾染5分钟，95％*1精分化敷秒，酒精脱水，二

7、甲苯透明，中性树胶封片。1．4PAS染色切片脱蜡．廿碘酸氧化IO分钟，n来永洗3分钟．蒸馏水浸洗2次．在Schiff试剂中染色10-20分钟．亚硫酸水洗切片2-3次水洗3分钟．苏丰精液淡染，脱水、透明、封片。1．5Olymllnm光学显微镜观察关*软骨及软骨F骨的变化，麦克奥迪MotieMed6．0罔像分析系统照相和分析2．1HE染色正常组戈节软骨表面光滑．四屡结构清晰nf辨，各屡次排列规律．软饲细胞大而饱满，呈圆形或椭圆形．袁崖早棱形．细胞核清晰，均匀深染，胞质均匀虹染：软哥基质染成监乜．以放射层为中心往上、下层染色

8、渐镄，潮线完整：轼召F骨厚而致密．哈弗氏系统l：富清晰．儡细胞呈棱彤．分布均匀．骨基质均匀红染(图A)模碰组黄口软骨表面粗糙．四层结构不易分辨．软骨细胞小．排列紊乱．多呈簇状．部分暖域细胞核州缩坏死．偏于一侧：软骨基质染色浅而无规律．潮线多不完整：软骨r骨哥质变薄哈弗氏系统少．部分不完整．可见日小梁日折．召细胞坏死，骨囊惟变形成，