联合使用潜伏逆转剂对CD4~+ T细胞记忆亚群HIV-1潜伏感染激活的研究

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1、分类号：R512.9单位代码：10159密级：公开学号：201520249硕士学位论文+中文题目：联合使用潜伏逆转剂对CD4T细胞记忆亚群HIV-1潜伏感染激活的研究英文题目：StudyontheeffectofHIV-1latency-reversingdrugcombinations+reversinglatencyHIV-1virusinCD4Tcellmemorysubsets论文作者：董安然指导教师：尚红教授学科专业：临床检验诊断学完成时间：2018年3月中国医科大学硕士学位论文+联合使用潜伏逆转剂对CD4T细胞记忆亚群HIV-1潜伏感染激活的研究Studyontheeffe

2、ctofHIV-1latency-reversingdrugcombinations+reversinglatencyHIV-1virusinCD4Tcellmemorysubsets论文作者董安然指导教师尚红教授申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科临床医学二级学科临床检验诊断学研究方向艾滋病病毒学论文起止时间2016年7月—2018年3月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年3月中国医科大学硕士学位论文摘要目的：高效抗逆转录病毒疗法（HAART，highlyactiveantireteoviraltherapy）的使用显著地降低了HIV感染者的发病率和死亡率

3、。然而，HAART治疗可以阻止HIV-1病毒复制，但却不能清除细胞内潜伏感染的HIV-1病毒。造成这种现象的原因是HIV感染者体内存在病毒潜伏库。+静息CD4T细胞被认为是体内最大、最重要的HIV病毒潜伏库（LatentHIV+Reservoir），是清除HIV的主要障碍。静息CD4T细胞中包含初始T细胞亚群（naïveTcell,TNA）、中心记忆T细胞亚群（centralmemoryTcell,TCM）、效应记忆T细胞亚群（effectormemoryTcell,TEM）、干细胞样记忆T细胞亚群（Tstemmemorycell,TSCM）、移行记忆T细胞亚群（transitiona

4、lmemoryTcell,TTM）等,Wightman.F.等人的研究显示，TCM、TEM、TSCM、TTM是重要的HIV-1病毒潜伏库。目前清除HIV潜伏感染的治疗常采用“ShockandKill”疗法，利用潜伏逆转剂（LatencyReversingAgent，LRA）使潜伏的HIV-1病毒被激活，从而被机体免疫系统以及药物识别、清除。如何高效激活潜伏病毒，尤其是有效激活不同储存库亚群中的病毒，成为清除病毒潜伏库的关键。LRA激活HIV-1病毒潜伏库的相关研究显示，联合应用LRA的激活效果有可能优于单独给药的激活效果。最新研究采用FISH-FLOW这一新技术提示两种PKC+激动剂（

5、Bryostatin-1和Ingenol-3-Angelate）对不同CD4T细胞亚群储存库的激活效果不同，推测其他类别LRA对于不同的亚群潜伏库的激活效果也不同。目前对+潜伏逆转剂激活病毒储存库的研究多集中在外周血单个核细胞和静息CD4T细胞，+在CD4T细胞记忆亚群病毒潜伏库中联合使用LRA进行激活的研究尚未见报道。+本课题拟对HAART治疗有效的HIV感染者CD4T细胞记忆亚群病毒潜伏库的激+活进行研究，探索不同的LRA单独及联合使用对CD4T细胞记忆亚群病毒潜伏库的激活效果，从而为临床针对性选择药物、提高激活效率提供依据。方法：1、研究对象。本研究选取了12例HIV感染者，其中

6、6例为未接受HAART治疗的感染者；6例为接受HAART治疗的感染者，另外选取6例健康人对照。2、通过密度梯度离心分离法提取外周血单个核细胞（PBMC）并计数。3、采用StemCell++公司的CD4T细胞富集试剂盒从PBMC中阴性选择CD4T细胞。4、通过+FISH-FLOW方法检测潜伏逆转剂激活患者CD4T细胞亚群（TCM、TEM、TNA）中潜伏感染HIVRNA实验方法的建立。以中国医科大学附属第一医院红丝带门诊I中国医科大学硕士学位论文患者分离出的39株病毒全长序列为基础，针对性地设计、优化bDNA探针。通过+对未治疗患者CD4T细胞内HIV-1RNA进行原位杂交、荧光信号放大，

7、最终通过流式细胞仪检测得到实验数据。5、潜伏逆转剂（LRA）对细胞死活及凋亡的影响。在健康人PBMC悬液中分别加入高、中、低浓度的Ingenol-3-Angelate、Panobinostat、Romidepsin、Prostratin、Bryostatin-1、JQ-1、PHA/IL-2以及空白对照组，培养24小时后，用7AAD和AnnexinV标记死亡和凋亡细胞，用BDFACSCantoⅡ流式细胞仪进行检测，用FlowjoV10软件进行分析