绵羊品种间精液耐冻性差异蛋白研究

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1、全日制硕士专业学位（毕业）论文绵羊品种间精液耐冻性差异蛋白研究学位申请人：刘若岩指导教师：田树军教授学科专业：养殖学位类别：农业硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一八年六月六日分类号：S814.8单位代码：10086密级：公开学号：20169140686绵羊品种间精液耐冻性差异蛋白研究StudyonDifferentialProteinofFreezingSemeninSheepBreeds学位申请人：刘若岩指导教师：田树军教授学科专业：养殖学位类别：农业硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一八年六月六日摘要精子是一个非常复杂且高度分化的细胞，精子冻融过程会在

2、一定程度上导致精子细胞器结构及细胞生理过程发生不可逆损伤，从而导致精子活力、运动性能、顶体和质膜完整性降低和发生凋亡，使精子功能和精液质量降低。本研究针对这一问题，将鲜精质量检测合格的绵羊四个品种的精液进行冷冻，利用iTRAQ技术研究绵羊精液耐冻性差异的蛋白质。主要研究结果如下：试验对澳洲白、白头杜泊、湖羊和黑头杜泊4个品种的种公羊的合格鲜精进行冷冻保存，结果：湖羊的总体活力、前进式活力、快速前进活力显著高于澳洲白、白头杜泊、黑头杜泊（P＜0.05）；白头杜泊的总体活力、前进式活力、快速前进活力显著低于澳洲白、湖羊、黑头杜泊（P＜0.05）。可见，四个绵羊品种间的精液耐

3、冻性以湖羊为最好，白头杜泊为最差。据以上试验结果，采集湖羊和白头杜泊的种公羊精液分别做混池，并收集湖羊鲜精（hx）、湖羊活精（hh）、湖羊冻精（hd）和白头鲜精（bx）、白头活精（bh）、白头冻精（bd）的样品，利用iTRAQ技术对每组样本总蛋白进行相对及绝对定量分析。结果：hh.vs.bh、hd.vs.bd、hd.vs.hx、bd.vs.bx分别存在56、54、121和205个差异蛋白（差异蛋白为FC≥1.5，FC≤0.67，同时p-value≤0.05）。其中log2FC绝对值大于0.8的差异蛋白，在hh.vs.bh组有ENO1、S100A12、HK3，在hd.vs

4、.bd组有KRT4、SYNE1、KRT73，在hd.vs.hx组有PRDX2、KRT5、AHSG，在bd.vs.bx组有ENO1、ALB、NPPC、Hyaluronidase、Alpha-1-acidglycoprotein、Beta-defensin、SPACA3、SPA17、AHSG、TSGA10、AFP、SPATA19、SPEM1。GO富集结果：hh.vs.bh组差异蛋白主要富集在细胞内非膜结合细胞器、生物调节、金属离子结合等；hd.vs.bd组差异蛋白主要富集在细胞内、脂蛋白代谢过程、结构分子活性等；hd.vs.hx组差异蛋白主要富集在细胞器、氧化应激反应、核酸

5、结合等；bd.vs.bx组差异蛋白主要富集在胞外区、碳水化合物代谢过程、酶抑制剂的活性等。KEGG富集结果：hh.vs.bh差异蛋白富集主要涉及吗啡成瘾、花生四烯酸代谢等；hd.vs.bd差异蛋白富集主要涉及剪接体、MAPK信号转导通路等；hd.vs.hx差异蛋白富集主要涉及N-糖链合成、乙型肝炎等；bd.vs.bx差异蛋白富集主要涉及维生素消化吸收、帕金森氏病等。综上所述，四个绵羊品种间的精液耐冻性以湖羊为最好，白头杜泊为最差。log2FC绝对值大于0.8的差异蛋白，在hh.vs.bh组有3个，其中1个上调，2个下调；在hd.vs.bd组有3个，都下调；在hd.vs.

6、hx组有3个，其中1个上调，2个下调；在bd.vs.bx组有13个，其中3个上调，10个下调。关键词：绵羊；精液；耐冻性；iTRAQ；差异表达蛋白StudyonDifferentialProteinofFreezingSemeninSheepBreedsRuoyanLiu(AnimalProduction)DirectedbyProfessorShujunTianAbstractSpermisaverycomplexandhighlydifferentiatedcell.Thespermfreezingandthawingprocesswillleadtoirrever

7、sibledamagetospermorganellestructureandphysiologicalprocessofcells.Asaresult,spermmotility,locomotorperformance,acrosomeandplasmamembraneintegrityarereduced.Andleadtoreducesspermfunctionandsemenquality.Inthisstudy,fourkindofsheepbreedssemenwerefrozenandiTRAQtechnologywasu