丹参多糖对小鼠免疫性肝损伤的炎症调节机制研究

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1、硕士学位（毕业）论文丹参多糖对小鼠免疫性肝损伤的炎症调节机制研究学位申请人：韩超指导教师：史万玉教授学科专业：临床兽医学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一八年五月二十五日分类号：S853.74单位代码：10086密级：公开学号：20152200407丹参多糖对小鼠免疫性肝损伤的炎症调节机制研究StudyonInflammatoryRegulatoryMechanismofSalviamiltiorrhizaPolysaccharidesonMiceImmunologicalLiverInjury学位申请人：韩超指导教师：史万玉教授学科专业：临床兽医学学位

2、类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一八年五月二十五日本试验得到农业部公益项目猪重大瘟病辨证施治关键技术与应用（201403051）的资助支持完成摘要现代药理研究发现丹参有效成分具有抗炎和免疫调节作用，丹参多糖对免疫因素介导的肝损伤有较好的缓解效果。但在分子层面上的作用机制却尚不完全清楚。本试验通过探究丹参多糖对炎症介质因子的释放和核转录因子蛋白NF-κB及丝裂原活化蛋白激酶MAPK表达的影响，在分子层面上探讨丹参多糖减轻免疫因素诱导的肝损伤的可能机制，为进一步开发和应用中草药多糖提供依据。体内试验，将100只昆明种小鼠随机分为5组，空白对照组（A），LPS模型

3、组（B），不同剂量丹参多糖（SMP）组（C组500mg/kg、D组250mg/kg和E组125mg/kg），每组20只。C，D，E组连续给予丹参多糖7d。LPS诱导小鼠免疫性肝损伤。LPS腹腔注射2h后，处死小鼠，收集血清，分光光度计检测血清中ALT，AST活性和HE染色观察肝脏病理变化。ELISA法检测血清TNF-α、IFN-γ、IL-6和PGE2的含量。RT-PCR检测肝组织中TNF-α、IFN–γ、COX-2、CXCL-10和iNOSmRNA的表达。Westernblot检测肝内COX-2、CXCL-10和iNOS蛋白表达及NF-κB通路中p65、IκBα和MAPK通路

4、中p38、JNK的磷酸化表达。结果表明，与空白组比较，LPS诱导小鼠血清中ALT、AST、TNF-α、INF-γ、PGE2和IL-6含量及肝组织中TNF-α，INF-γ、COX-2、iNOS和CXCL-10mRNA表达均升高。肝组织内NF-κB通路中p65、IκBα和MAPK通路中p38、JNK的磷酸化表达也升高。不同剂量的丹参多糖（500mg/kg、250mg/kg、125mg/kg）能显着降低血清ALT、AST、TNF-α、INF-γ、PGE2、IL-6含量及肝组织内TNF-α、IFN-γ、COX-2、CXCL-10和iNOSmRNA的表达。同时与模型组比较，丹参多糖各组

5、也能显著下调肝组织中CXCL-10和iNOS蛋白的表达及NF-κB通路中p65、IκBα和MAPK通路中p38、JNK磷酸化的表达。体外试验，MTT法检测SMP的细胞毒性。通过Diff-Quik染色观察RAW264.7的形态学变化。ELISA检测LPS诱导的RAW264.7细胞上清液中炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-10、IL-6、PGE2的产生。Griss法检测LPS诱导的RAW264.7细胞的NO释放。Real-timeQPCR检测LPS诱导的RAW264.7细胞中TNF-α、IL-6、iNOS和COX-2的转录水平。Westrenblot法检测核转录因子NF-κB

6、的蛋白表达。结果显示，丹参多糖作用于RAW264.7细胞的安全用药范围小于3mg/mL。与LPS处理过的细胞相比，不同剂量的丹参多糖（2、1、0.5mg/mL）均能够改善LPS诱导的细胞变形程度，减少伪足数量，减少细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10、IL-6、PGE2和NO的分泌。丹参多糖还能显着抑制TNF-α、IL-6、iNOS、COX-2mRNA的转录，及NF-κB通路中p-p65和p-IκBa的蛋白表达。结论本研究初步证实了丹参多糖可以通过调控NF-κB通路和MAPK通路来抑制LPS引起的炎症反应，减少炎症因子的产生，减轻炎性细胞浸润肝细胞的程度。从而达到缓解L

7、PS引起的肝损伤。关键词：丹参多糖；免疫性肝损伤；炎症反应；炎症介质；NF-κBStudyonInflammatoryRegulatoryMechanismofSalviamiltiorrhizaPolysaccharidesonMiceImmunologicalLiverInjuryGraduatecandidate:ChaoHanAdvisor:Prof.WanyuShiMajor:ClinicalVerterinaryMedicineAbstractModernpharmacologicalstu