大蒜多糖b对小鼠免疫性肝损伤的干预作用

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1、大蒜多糖B对小鼠免疫性肝损伤的干预作用作者：孔祥槐，郑敏，张明霞，王雪静【摘要】　　目的观察大蒜多糖B对小鼠免疫性肝损伤的影响。方法采用尾静脉注射卡介苗（BCG）加脂多糖（LPS）诱发小鼠免疫性肝损伤。生化方法测定血清及肝组织ALT、AST及血清NO。显微镜观察肝组织病理结构变化。计算各组动物脾脏及胸腺质量体质量比值。结果模型组脾质量体质量比值、血清ALT、AST及NO活性显著升高（P<0.01），肝组织ALT及AST活性显著下降，肝细胞广泛水肿，呈气球样变，血管周围有炎性细胞浸润。大蒜多糖B（600mg/kg.d,ig×12）治疗能使BCG+LPS免疫性肝损伤小鼠脾质量体质量比值下降（

2、P<0.01），血清ALT、NO、AST活性较模型组显著降低（P<0.01）但仍高于正常对照组（P<0.01）;肝组织ALT、AST较模型组显著增高（P<0.01）但低于正常对照组（P<0.01）；肝细胞有轻度水肿及疏松化，肝窦变窄，但病变程度较模型组明显减轻。结论大蒜多糖B可抑制机体免疫活性对小鼠免疫性肝损伤具有一定的保护作用。【关键词】免疫;肝损伤；大蒜多糖B8　　研究表明，病毒性肝炎的形成与机体的免疫应答密切相关［1］，卡介苗+脂多糖(BCG+LPS)诱导的免疫性肝损伤为病毒性肝炎发病机制及药物防治研究的有效实验模型［2～4］。从传统中药和食物中寻找有效的护

3、肝成分已成为病毒性肝炎防治研究的趋势。大蒜药食同源，我们从大蒜球根中提取分离出新的安全低毒有效成分大蒜多糖A、B、C，并证实三者对四氯化碳所致小鼠化学性肝损伤具有保护作用［5］；除A外，B及C在体外还有抗乙型肝炎病毒作用［6］；大蒜多糖C对BCG+LPS诱导的免疫性肝损伤小鼠肝功能具有保护性作用［3］并与其抑制过度激活的体液免疫及细胞免疫功能有关［7］，大蒜多糖B则尚未进行研究。为此，本研究则进一步观察大蒜多糖B对小鼠BCG+LPS免疫性肝损伤小鼠有无保护作用，为其作为有效的抗病毒性肝炎药物提供实验及理论依据。　　1材料　　1.1动物健康雄性昆明小鼠，体质量22～25g，由湖北省医学科学院提供

4、，饲养适应1周后开始实验。　　1.2药品、试剂及仪器大蒜多糖B按照文献［5］方法提取。冻干卡介苗制（BCG）：兰州生物制品研究所，批号为20020501，以灭菌生理盐水配制成10g/L的溶液备用。脂多糖（LPS）：SIGMA公司。AST试剂盒：美国RANDOX公司产品，批号为3611H。ALT试剂盒：浙江东欧生物工程有限公司产品，批号为2002060668。NO试剂盒及蛋白定量试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。其余试剂为国产分析纯。主要仪器：日本东芝TBA-40FR全自动生化分析仪，HIACHIU-2010紫外分光光度计，医学图像分析系统（BI2000型,成都泰盟科技有限公司），Olympu

5、sBX40系统生物显微镜。　　2方法　　2.1动物模型、分组、标本采集及制备小鼠免疫性肝损伤模型采用卡介苗（BCG）加脂多糖（LPS）诱发即小鼠先尾静脉注射1%BCG活菌2mg/只致敏，12d后再尾静脉注射微量LPS（4μg/只）诱导肝损伤。小鼠随机分为正常对照组、免疫性肝损伤模型组、大蒜多糖B组［600mg/（kg·d），ig×12］，每组20只。实验第1天，模型组及大蒜多糖B治疗组每只小鼠尾静脉注射1%BCG溶液2mg即0.2ml，正常对照组尾静脉注射灭菌生理盐水(0.2ml/只)。次日起，正常对照组和模型组ig生理盐水qd×12；大蒜多糖B组ig600mg/kg,qd×12。实验第12天

6、，模型组、大蒜多糖B组每只小鼠尾静脉注射LPS4μg，正常对照组给予等容积无菌生理盐水。12h后，小鼠称重后摘眼球取血，收集血清备用；同时立即剖腹取同一叶肝组织，以冰生理盐水洗净，切取部分放入4%多聚甲醛中固定，部分置于-86℃冰箱中冻存备测；取胸腺及脾脏称重，计算胸腺及脾脏质量体质量比。　　2.28指标测定及观察蛋白定量采用考马斯亮蓝法，小鼠血清及肝组织ALT和AST活性采用速率法以全自动生化分析仪测定，具体操作按说明书步骤进行。NO含量测定采用酶法,按试剂盒说明书进行。肝组织固定标本按常规方法制作石蜡切片及HE染色，光镜观察组织结构变化并显微拍照。　　2.3统计学分析采用SPSS13.0软

7、件进行统计分析。所有数据以±s表示.多组间均数比较采用one-wayanalysisofvariance(ANOVA)及FisherLSDtest(Least-significantdifference)分析,P＜0.05具有统计学差异。　　3结果　　3.1大蒜多糖B对免疫性肝损伤小鼠脾及胸腺质量体质量比的影响由表1可知，免疫性肝损伤模型组脾质量体质量比值显著增加（P<0.01），而大蒜多糖