SNT2722-2010出血性败血症检疫技术规范.pdf

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1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准!"!#!"!!"!#$#出血性败血症检疫技术规范$%&'&()*(+,'-)-.-/0-'1&+2-''1&3*.4+,)*.&+2*&!#$#5$$5#$发布!#$$5#%5#$实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２７２２—２０１０版权所有·禁止翻制、电子发售前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准采用重新起草法，修改采用国际动物卫生组织《陆生动物诊断试验和疫苗手册》（２００９版），第２．４．１２

2、“出血性败血症”部分。主要的技术性差异如下：———对标准文本进行了调整；———对血清型鉴定方法进行细化和完善。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国山西出入境检验检疫局。本标准主要起草人：宋阳威、郑志高、张常印、廉慧锋、李东明、易海华、王凯明、唐泰山、吴亚力、张敬友。Ⅰ犛犖／犜２７２２—２０１０版权所有·禁止翻制、电子发售出血性败血症检疫技术规范１范围本标准规定了出血性败血症的病原鉴定和血清型鉴定方法的技术要求。本标准适用于进出

3、境牛出血性败血症的检疫和诊断。２缩略语下列缩略语适用于本文件。ＡＧＩＤ（ａｇａｒｇｅｌｉｍｍｕｎｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎＴｅｓｔ）：琼脂免疫扩散试验ＣＩＥＰ（ｃｏｕｎｔｅｒｉｍｍｕｎｏｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓＴｅｓｔ）：对流免疫电泳试验ＨＳ（ｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｓｅｐｔｉｃａｅｍｉａ）：出血性败血症ＩＨＡ（ｉｎｄｉｒｅｃｔｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎＴｅｓｔ）：间接血凝试验３疾病概述出血性败血症病原学、流行病学、症状和病理变化、检疫及诊断参见附录Ａ。４检疫方法４．１细菌分离和鉴定４．１．１

4、材料和试剂４．１．１．１细菌分离培养基：见附录Ｂ。４．１．１．２细菌生化鉴定培养基和试剂：见附录Ｂ。４．１．２样品的采集４．１．２．１采集动物死后数小时内的血液或心脏拭子。４．１．２．２如果动物死亡时间较长，可取无组织长骨。４．１．３样品的培养４．１．３．１血液样品或２ｍＬ～３ｍＬ灭菌生理盐水拭子洗液接种于血琼脂平板，麦康凯琼脂平板，改良马丁氏琼脂平板，置３７℃培养２４ｈ。４．１．３．２无组织长骨表面用酒精搽拭后劈开，无菌抽取骨髓接种于血琼脂平板，麦康凯琼脂平板，改良马丁氏琼脂平板，置３７℃培养２４ｈ

5、。４．１．４细菌鉴定４．１．４．１培养特性新分离的出血性败血症多杀性巴氏杆菌（ＨＳ多杀性巴氏杆菌）在血琼脂上３７℃培养２４ｈ后，能形１犛犖／犜２７２２—２０１０版权所有·禁止翻制、电子发售成光滑的、有灰色光泽的半透明菌落，直径约１ｍｍ。在改良马丁氏琼脂上划线分离可获得纯培养物。老龄菌特别是在那些无血培养基上的，形成小菌落。在麦康凯琼脂培养基上不生长。４．１．４．２细菌形态特征血液涂片用革兰氏、亚甲蓝或利什曼法染色可见革兰氏阴性、短的、卵圆形、两极着染的球杆菌。有时还有一定程度的多形性，尤其是在老龄培养

6、物中，呈现不同长度的杆状。用亚甲蓝或利什曼法染色时，两极着色更明显。４．１．４．３生化特性ＨＳ多杀性巴氏杆菌生化特性见表１。表１犎犛多杀性巴氏杆菌生化特性产酸氧过氧化硝硫尿柠檬山阿拉麦水化吲哚酸化素明胶葡梨木糖芽杨乳糖酶氢酶盐氢酶酸盐萄蔗糖醇伯糖糖苷糖＋＋＋＋－－－－＋＋（＋）＋／－＋／－＋／－（－）（－）注：＋：阳性反应；（＋）：多数菌株；＋／－：部分菌株；（－）：少数菌株；－：阴性反应。４．１．５结果的判定与解释细菌培养特性、形态特征和生化特性符合４．１．４时，则判定为ＨＳ多杀性巴氏杆菌分离阳性。

7、４．２血清型鉴定４．２．１快速玻片凝集试验（荚膜分型）４．２．１．１材料和试剂４．２．１．１．１多杀性巴氏杆菌Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ分型血清。４．２．１．１．２参考菌株（６：Ｂ和６：Ｅ）。４．２．１．１．３生理盐水。４．２．１．１．４待测荚膜抗原型ＨＳ多杀性巴氏杆菌。４．２．１．２操作方法４．２．１．２．１将玻璃板划成每格３ｃｍ×３ｃｍ的区域，每一格下留少许位置，用于填写样品编号。４．２．１．２．２上述各格标上待检样品编号，参考菌株血清型，每格加２５μＬ无菌生理盐水。４．２．１．２．３用接种环挑取细菌纯培养物

8、于玻片上的生理盐水中混匀，加一滴分型血清，混匀并缓慢加热玻片。４．２．１．３结果判定４．２．１．３．１参考菌株的对照试验出现絮状凝集，则试验成立，可以判定。否则，本次试验无效。４．２．１．３．２在３０ｓ内出现粗的絮状凝集者判为阳性。老龄培养物需要较长时间出现细的粒状凝集。２犛犖／犜２７２２—２０１０版权所有·禁止翻制、电子发售４．２．２间接血凝试验（荚膜分型）４．２．２．１材料和试剂４．２．２．１．１多杀性巴氏杆菌Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ分型血清。４．２．２．１．