SNT2663-2010贝类中失忆性贝类毒素检验方法酶联免疫吸附法.pdf

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1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准!"!#!""#"!$%$贝类中失忆性贝类毒素检验方法酶联免疫吸附法$%&%'()*+&),*,-+(*%.)/.0%11-).02,).,*)*.0%11-).0"3*45(%61)*7%8)((9*,.,':%*&+..+5!$%$6%%6$%发布!$%%6$&6$%实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准贝类中失忆性贝类毒素检验方法酶联免疫吸附法ＳＮ／Ｔ２６６３—２０１０

2、中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６印张０．５字数９千字２０１１年４月第一版２０１１年４月第一次印刷印数１—１６００书号：１５５０６６·２２１７４８定价１４．００元犛犖／犜２６６３—２０１０版权所有·禁止翻制、电子发售前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽

3、宁出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局。本标准主要起草人：王秋艳、曹际娟、王刚、赵昕、郑惠芳、于兵、黄大亮、吴振兴、徐维加、郑秋月、徐君怡。Ⅰ犛犖／犜２６６３—２０１０版权所有·禁止翻制、电子发售贝类中失忆性贝类毒素检验方法酶联免疫吸附法１范围本标准规定了贝类及其制品中失忆性贝类毒素检验的酶联免疫吸附法。本标准适用于贝类及制品中失忆性贝类毒素的检测。２术语、定义和缩略语２．１术语和定义下列术语和定义适用于本文件。２．１．１失忆性贝类毒素犪犿狀犲狊犻犮狊犺犲犾犾

4、犳犻狊犺狆狅犻狊狅狀；犃犛犘化学结构以软骨藻酸为代表，摄食后可产生头晕目眩，定向力障碍及持续性短期记忆缺失等症状的存在于贝类体内的海洋生物毒性物质的总称，它是一类具有神经兴奋的氨基酸类物质。２．１．２软骨藻酸犱狅犿狅犻犮犪犮犻犱；犇犃主要由拟菱形藻属硅藻产生的一种谷氨酸和红藻酸的类似物，能够污染鱼贝类等海洋生物，是引起人类记忆缺失性中毒的致病因子。２．２缩略语下列缩略语适用于本文件。ＡＳＰ（ａｍｎｅｓｉｃｓｈｅｌｌｆｉｓｈｐｏｉｎｓｏｎ）：失忆性贝类毒素。ＥＬＩＳＡ（ｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂ

5、ｅｎｔａｓｓａｙ）：酶联免疫吸附试验。３样品保存和制备３．１样品的保存３．１．１样品要有充分的代表性并尽可能没有个体差异，且至少要１０个以上。去壳贝肉、带壳的或罐装的等，均应采取足够的个数并使贝肉达２００ｇ以上。３．１．２远离实验室不能及时送检的样品，除了在常温下品质不会发生变化的，应将样品置于保温盒中冷冻送检。如为带壳样品，应按３．２的方法开壳，去除水分后冷冻送检。３．２样品的制备３．２．１生鲜带壳样品的前处理用清水将贝壳外表彻底洗净，切断闭壳肌，开壳，用重蒸馏水淋洗内部去除泥沙及其他外来物。将闭壳肌和连接在

6、胶合部的组织分开，仔细取出贝肉，切勿割破肉体。开壳前不要加热或用麻醉剂。收集１００ｇ贝肉置于筛子中沥水５ｍｉｎ（不要使肉堆积），检出碎壳等杂物，将贝肉均质，备用。１犛犖／犜２６６３—２０１０版权所有·禁止翻制、电子发售３．２．２冷冻样品的前处理在室温下，使冷冻样品呈半冷冻状态。带壳冷冻样品，按３．２．１方法清洗、开壳、淋洗取肉，此时的贝肉仍呈冷冻状态，除去贝肉外部附着的冰片，轻轻抹去水分后；事先已去除水分的冷冻去壳样品，室温缓化。将１００ｇ上述贝肉均质，备用。３．２．３贝类罐头将罐头内容物沥干水分，倒入均质器充

7、分均质，备用。３．２．４贝肉干制品称取１００ｇ干制品放入足量清水中浸泡２４ｈ～４８ｈ（４℃冷藏），沥干、备用。３．２．５盐渍品用清水洗涤，流水脱盐，沥干，备用。４测定方法４．１测定原理本方法的测定基础是竞争性酶联免疫反应，酶标板上包被有针对软骨藻酸抗体的捕捉抗体，加入抗软骨藻酸抗体、标准液或样品溶液及软骨藻酸酶标记物，游离的失忆性贝类毒素与软骨藻酸酶标记物竞争软骨藻酸抗体，同时软骨藻酸抗体与捕捉抗体连接。没有结合的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质和显色剂加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为

8、蓝色的产物。加入反应终止液后使颜色由蓝转变为黄色。在４５０ｎｍ测量微孔溶液的吸光度值，样品中的失忆性贝类毒素溶液与吸光度值成反比，按绘制的标准曲线定量计算。４．２试剂和材料除另有规定外，所有化学试剂均为分析纯或生化试剂，水为重蒸馏水。４．２．１无水甲醇。４．２．２半对数坐标纸。４．２．３ＤＡ标准物质。４．２．４ＤＡ酶标记物。４．２．５抗ＤＡ抗体。４．２．６包被有捕捉抗体的微孔板。４．２