MMFSCNJ出口贝类麻痹性贝类毒素检验方法.docx

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1、MM_FS_CNJ_02出口贝类麻痹性贝类毒素小鼠实验法MM_FS_CNJ_0242出口贝类麻痹性贝类毒素检验方法1.适用范围本方法适用于出口海产双壳类贝肉，贝柱和其他可供食用部分的麻痹性贝类毒素的检验。2.定义麻痹性贝类毒素(PSP):化学结构以石房蛤毒素(Saxitoxin)为代表的，摄食后可产生麻痹作用的存在于贝类体内的海洋生物毒性物质的总称；CF(conversionfactor):毒素转换系数；DF(dilutionfactor):稀释系数；MU(mouseunit):鼠单位；CMU(correctedmouseunit):校正鼠单位；中位数:把变量值按大

2、小次序排列，居于中间位置的那个数值就是中位数。3.原理概要本方法采用鼠单位测定，对PSP予以定量。鼠单位定义为：对体重为20g的小白鼠腹腔注射1mL贝类提取液后，在15min时杀死小鼠所需的最低毒素量。采用Saxitoxin作为毒素的标准品，将鼠单位换算成毒素的微克数。根据小鼠注射贝类提取液后的死亡时间，查出鼠单位，并按小鼠体重，校正鼠单位，计算确定每100g贝肉内的PSP的微克数。所测定结果代表存在于贝肉内各种化学结构的PSP毒素的总量。4.主要试剂和仪器.主要试剂盐酸溶液：L,将15mL浓HCl用蒸馏水稀释至1L；盐酸溶液：5mol/L，将浓HCI用蒸馏水稀释至

3、100mL氢氧化钠溶液：L,将NaOH溶于1L蒸馏水中；麻痹性贝类毒素(Saxitoxin)标准液：100卩g/mL，经酸化，含有20%勺乙醇作为保护剂，冷藏时，无限期稳定；体重19〜21gICR品系的雄性健康小白鼠。.仪器均质器；天平(感量；离心机；pH计；秒表；玻璃器皿：烧杯、量筒、容量瓶、搅棒等；注射器(1mL)。5.试样的抽取与制备.检验批以不超过100t为一检验批，同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、季节和规格等。.抽样数量按各检验批的重量，依下表抽取样品:检验批的重量，t抽样点（件）数混合样品数10以下10211〜5015351〜100

4、204如为散装的应均匀抽样.抽样方法按规定的抽样点（件）数，随机抽取样品。每5点（件）抽取的原始样品组成一个混合样（即检验样品），其重量不少于2kg，装入清洁容器内，加封标记后，及时送交实验室检验。.分析样品的米集分析样品要有充分的代表性，依受检贝类品种决定样品的采集量。取样个数不少于12个贝类个体，即从2kg混合样品中挑选良好的贝去壳，去壳肉量应达200g。对于个体过小的品种，则以去壳后肉量不少于200g来决定采集个数。新鲜贝类不能及时送检，按方法将贝肉分离，将沥水后的200g贝肉放入100mLHCIL）中，置于4C冷藏保存（切勿冷冻），备检。.试样制备牡蛎、蛤及

5、贻贝用清水将贝壳外表彻底洗净，切断闭壳肌，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其他外来物。将闭壳肌和连接在胶合部的组织分开，仔细取出贝肉，切勿割破肉体。开壳前不要加热或用麻醉剂。收集约200g肉置于10号筛子中沥水5min（不要使肉堆积），捡出碎壳等杂物，将贝肉均质。扇贝取可食部分用作检测。沥干及均质过程同。贝类罐头将罐内所有内容物（肉及液体）倒入均质器充分均质。如果是大罐，将贝肉沥水并收集沥下的液体，分别称重，将固形物和汤汁按比例混合，充分均质。用酸保存的贝肉沥去酸液，分别存放贝肉及酸液，将沥干的贝肉充分均质。冷冻贝类在室温下，使冷冻的样品（带壳或脱壳的）呈半冷冻状态，

6、按方法开壳、淋洗、取肉、均质。贝肉干制品干制品可于HCIL）溶液中浸泡（冷藏），按方法沥干、均质。.试样保存上述中经均质处理的样品如不能及时检测，可取100g已均质贝肉加入100mLHCIL）溶液，置于4C冷藏保存（尽可能及时检验）。1.过程简述标准工作液的配制用移液管取1mL（100卩gSaxitoxin/mL）标准液于100mL容量瓶中，加入用HCI酸化至pH3的蒸馏水并定容。该液为1卩gSaxitoxin/mL,pH在〜之间。在3〜4C下能稳定数周。分别用10、15、20、25和30mL水稀释10mL浓度为1卩g/mL标准液，稀释液的pH应为2〜4。.中位数死

7、亡时间的标准液选择将的各种浓度的稀释液各1mL腹腔注射数只小鼠，选择中位数死亡时间为5〜7min的浓度剂量。如某浓度稀释液已可达到要求，还需以1mL水的增减量进行补充稀释试验。例如：用25mL水稀释的10mL标准液在5〜7min杀死小鼠，还需进行24＋10和26＋10的稀释度试验。以10个小鼠为一组，用中位数死亡时间在5〜7min范围内的二种（最好是三种）稀释度的标准液注射小鼠。记录每只小鼠腹腔注射完毕至停止呼吸的所需死亡时间。每只小鼠事先称重，精确到。记录注射完毕至死亡时间的最短间隔为5s，即7s校正为5s，8s校正为10s（见附录A）。.毒素转换系数的计算计